| 检测猪丹毒杆菌抗体重组SpaA ELISA的建立 |
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| 引用本文： | 姚焱彬,李倩文,杨志鹏,陆萍,魏建忠,孙裴,李郁.检测猪丹毒杆菌抗体重组SpaA ELISA的建立[J].微生物学通报,2017,44(3):739-748. |
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| 作者姓名： | 姚焱彬 李倩文 杨志鹏 陆萍 魏建忠 孙裴 李郁 |
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| 作者单位： | 1. 安徽农业大学动物科技学院 安徽 合肥 230036,1. 安徽农业大学动物科技学院 安徽 合肥 230036,1. 安徽农业大学动物科技学院 安徽 合肥 230036,1. 安徽农业大学动物科技学院 安徽 合肥 230036,1. 安徽农业大学动物科技学院 安徽 合肥 230036,1. 安徽农业大学动物科技学院 安徽 合肥 230036,1. 安徽农业大学动物科技学院 安徽 合肥 230036;2. 安徽省畜禽产业共性技术研究院 安徽 合肥 230036 |
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| 基金项目： | 国家星火计划重点项目(No. 2014GA710002)；安徽省质量工程项目(No. 2013sxzx008)；安徽农业大学大学生创新基金项目(No. XJ2015142)；安徽省生猪产业体系基金项目 |
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| 摘 要： | 【目的】利用表达纯化的猪丹毒杆菌表面保护性蛋白SpaA,建立检测猪丹毒杆菌抗体的间接ELISA方法。【方法】克隆扩增猪丹毒杆菌SpaA基因,并将SpaA基因与原核表达载体p GEX-6P-1连接,通过PCR、双酶切及测序鉴定后,将阳性重组质粒转化入受体菌E.coli Rosetta(DE3),并利用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。将SpaA重组蛋白按不同浓度包被酶标板,通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度及血清稀释度,并对其他条件进行优化,最终建立检测猪丹毒杆菌抗体的间接ELISA方法。【结果】利用克隆表达的猪丹毒杆菌SpaA蛋白作抗原,通过方阵滴定法确定蛋白最佳包被浓度为1.0 mg/L,血清的最佳稀释度为1:100,建立了检测猪丹毒杆菌抗体的间接ELISA方法,批内及批间变异系数均小于10%,具有较好的重复性及特异性。用建立的间接ELISA方法检测猪丹毒疫苗免疫后的健康猪血清样品,检测结果与美国TSZ公司猪丹毒杆菌抗体检测试剂盒和Western blot鉴定结果进行对比,两者总符合率分别为92.20%、92.59%。【结论】试验利用原核表达的SpaA重组蛋白作抗原建立的检测猪丹毒杆菌抗体的间接ELISA方法,特异性强、重复性好、敏感性高,可用于猪丹毒杆菌的抗体检测及流行病学调查。
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| 关 键 词： | 猪丹毒杆菌，表面保护性蛋白SpaA，克隆表达，间接ELISA，建立 |
Development of recombinant SpaA-based ELISA for detection of antibodies against swine erysipelas |
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| YAO Yan-Bin,LI Qian-Wen,YANG Zhi-Peng,LU Ping,WEI Jian-Zhong,SUN Pei and LI Yu.Development of recombinant SpaA-based ELISA for detection of antibodies against swine erysipelas[J].Microbiology,2017,44(3):739-748. |
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| Authors: | YAO Yan-Bin LI Qian-Wen YANG Zhi-Peng LU Ping WEI Jian-Zhong SUN Pei and LI Yu |
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| Institution: | 1. College of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei, Anhui 230036, China,1. College of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei, Anhui 230036, China,1. College of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei, Anhui 230036, China,1. College of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei, Anhui 230036, China,1. College of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei, Anhui 230036, China,1. College of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei, Anhui 230036, China and 1. College of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei, Anhui 230036, China;2. Anhui Institute of Generic Industrial Science and Technology in Livestock and Poultry, Hefei, Anhui 230036, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Erysipelothrix rhusiopathiae Recombinant surface protect antigen A Protein Clone expression Indirect ELISA establish |
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