重组人维甲酸X受体α的克隆与表达及其与甲状腺受体的结合 |
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作者姓名: | Zhang Y Hu LL Xie W Sun P Zuo AJ Zhang JY |
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作者单位: | 天津医科大学内分泌研究所/代谢病医院,天津市激素与发育重点实验室,天津,300070 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(编号:30800955); 天津市自然科学基金重点项目(编号:09JCZDJC21000)资助 |
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摘 要: | 维甲酸X受体α(Retinoid X receptor-α,RXR-α)属于核受体家族,在调节基因转录及信号转导方面发挥着重要的作用。为了深入研究RXR-α的生物学作用,文章利用RT-PCR技术扩增了人RXR-α基因,并将其克隆入原核表达载体pQE-30Xa,转化大肠杆菌M15[PREP4],异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE可见与预期大小相符的蛋白条带,Western blotting证实该条带为重组人RXR-α蛋白,并用Ni2-NTA柱进行亲和层析纯化。免疫共沉淀结果显示其具有与TRβ1结合的能力。电泳迁移率改变实验(EMSA)显示RXR-α与TRβ1形成的杂二聚体具有与DNA结合的能力。结果显示,文章已成功建立了重组人RXR-α的大肠杆菌表达系统,表达产物具有很好的生物学活性。
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关 键 词: | 维甲酸X受体α 巢式PCR 免疫共沉淀 |
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