| 火球菌Pyrococcus furious瓣状核酸内切酶1的表达纯化及酶学特征 |
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| 引用本文： | 谢娟娟,王风平,刘喜朋.火球菌Pyrococcus furious瓣状核酸内切酶1的表达纯化及酶学特征[J].微生物学报,2017,57(9):1352-1361. |
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| 作者姓名： | 谢娟娟 王风平 刘喜朋 |
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| 作者单位： | 上海交通大学生命科学技术学院, 微生物代谢国家重点实验室, 上海 200240,上海交通大学生命科学技术学院, 微生物代谢国家重点实验室, 上海 200240,上海交通大学生命科学技术学院, 微生物代谢国家重点实验室, 上海 200240 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31371260，J1210047） |
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| 摘 要： | 【目的】克隆表达和纯化火球菌Pyrococcus furious来源的瓣状核酸内切酶1基因pFEN1(PF1414),对该蛋白的活性和酶学特征进行鉴定和分析。【方法】将pFEN1在大肠杆菌中进行重组表达,经亲和层析纯化得到电泳纯蛋白;利用人工合成的荧光标记的寡核苷酸片段作为底物,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定pFEN1在体外的酶学特性以及与其他蛋白的相互作用。【结果】pFEN1重组蛋白能在大肠杆菌中进行高效表达;高于100 mmol/L的NaCl会抑制pFEN1的活性;pFEN1的核酸酶活性依赖于金属离子Mg~(2+)或Mn~(2+),且Mn~(2+)的催化效率优于Mg~(2+);来自嗜热古菌的pFEN1是一种耐高温蛋白,最适反应温度为60–65°C;增殖细胞核抗原(PCNA)能促进pFEN1的内切酶活性。【结论】本研究证实pFEN1是一种Mg~(2+)或Mn~(2+)依赖的核酸内切酶,且PCNA能促进该酶的活性。
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| 关 键 词： | 嗜热古菌 火球菌 瓣状核酸内切酶1 增殖细胞核抗原 |
| 收稿时间： | 2017/3/15 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2017/4/19 0:00:00 |
Expression, purification and characterization of flap endonuclease 1 from Pyrococcus furious |
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| Juanjuan Xie,Fengping Wang and Xipeng Liu.Expression, purification and characterization of flap endonuclease 1 from Pyrococcus furious[J].Acta Microbiologica Sinica,2017,57(9):1352-1361. |
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| Authors: | Juanjuan Xie Fengping Wang and Xipeng Liu |
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| Institution: | State Key Laboratory of Microbial Metabolism, School of Life Science and Biotechnology, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200240, China,State Key Laboratory of Microbial Metabolism, School of Life Science and Biotechnology, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200240, China and State Key Laboratory of Microbial Metabolism, School of Life Science and Biotechnology, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200240, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | thermophilic archaea Pyrococcus furious flap endonuclease 1 proliferating cell nuclear antigen (PCNA) |
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