人清道夫受体AII胞外部分在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的分泌表达 |
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引用本文: | 刘明, 洪斌, 巫晔翔, 王丽非, 司书毅, 李元,.人清道夫受体AII胞外部分在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的分泌表达[J].生物工程学报,2004,20(6). |
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作者姓名: | 刘明 洪斌 巫晔翔 王丽非 司书毅 李元 |
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作者单位: | 中国协和医科大学中国医学科学院医药生物技术研究所; |
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摘 要: | 清道夫受体A (SR-A)介导巨噬细胞无限制摄取修饰的低密度脂蛋白 (Mldl)形成泡沫细胞 ,继而形成动脉粥样硬化病灶 ,在动脉粥样硬化的发生、发展过程中具有重要作用 ,被认为是治疗动脉粥样硬化的潜在靶点。本文应用RT PCR方法扩增得到编码人Ⅱ型SR A胞外部分 (shSR AII)的Cdna ,将其克隆至毕赤酵母 (Pichiapastoris)分泌表达载体Ppic9k构建重组表达质粒P9k shSR AII。将重组表达质粒线性化后 ,电转化毕赤酵母GS115 ,用原位双膜法筛选获得高表达shSR AII的重组菌株GS115 P9k shSR AII。重组菌株经 1%甲醇诱导 ,SDS PAGE、Westernblot分析表明shSR AII获得了分泌表达。Ligandbindingblot结果表明表达的shSR AII具有与配基oxLDL结合的生物活性。U937泡沫细胞模型进一步表明shSR AII可通过竞争性结合oxLDL来抑制泡沫细胞的形成 ,为以shSR AII为靶点建立抗动脉粥样硬化药物筛选模型奠定了基础.
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关 键 词: | shSR-AII Pichia pastoris 动脉粥样硬化 |
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