重组人载脂蛋白A-Ⅰ在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的高表达

高密度脂蛋白(High-density Lipoprotein，HDL)是血浆中重要的脂蛋白，其主要成分为载脂蛋白AⅠ(Apoliprotein AⅠ，ApoAⅠ为了大量制备该蛋白，首先尝试利用Pichia pastoris表达系统高效表达ApoAⅠ。通过PCR扩增获得天然含人载脂蛋白ApoAⅠ的基因片段，将其插入到P．pastoris分泌型载体pPIC9K上，BglⅡ酶切线性化后电转化P．pastoris GS115，将获得的1000多个转化子依次在含不同G418浓度的YPD平板筛选高抗性转化子，得到的22个高抗性转化子经甲醇诱导，SDS-PAGE检测得到6株高表达菌。然后对其中的高表达菌株AP16的培养及诱导条件进行了优化，结果显示：接种后培养24～28h，转入诱导阶段，培养基pH值在7—7．5，菌体密度OD600=80左右，以1％甲醇诱导96h最有利于ApoAⅠ的表达，表达水平达160mg／L。14L发酵罐结果显示表达水平与摇瓶相当，均高于其它表达系统，为大批量制备奠定了基础。