HIV-1 Tat蛋白对人类疱疹病毒8型复制的影响

用HindⅢ将HIV-1Tat101蛋白编码基因从pEV质粒中切出，BamHI、NotⅠ将绿色荧光蛋白(GFP)编码基因从表达质粒pcDNA3．1 ／GFP中切出，分别插入到质粒LZRSpBMN-Z中，构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS—Tat101和LZRS—GFP。采用磷酸钙转染法将两重组质粒转染到含反转录病毒env,gal和pol编码基因的包装细胞Phoenix(φNX)中，嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系。分别收集稳定细胞系分泌的病毒上清，并感染体外培养的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)BC2BL-1细胞。收集LZRS—GFP重组病毒感染的BCBL-1细胞进行流式细胞计数，检测GFP表达水平。收集LZRS—Tat101重组病毒感染的BCBL-1细胞，提取蛋白作Western blot，检测Tat蛋白表达状况；取细胞总RNA作Northem blot和定量PCR，检查HHV-8次要衣壳蛋白ORF26 mRNA转录水平。重组LZRS—Tat101病毒进一步感染HL3T1细胞(HeLa细胞包含HIV-1-LTR／CAT报告基因)，收集感染细胞提取蛋白，检测CAT活性，评价Tat生物学功能。PCR扩增HHV-8复制和转录激活蛋白Rta启动子区上游序列，并克隆至pGL-3载体中，构建Rta启动子 虫荧光素酶(Luciferase)报告基因重组质粒。此重组质粒进一步电转染预先感染了LZRS—Tat101病毒的BC-3细胞，TPA刺激后收集细胞，检测Luciferase活性。结果显示：①重组反转录病毒感染BCBL-1细胞，一次感染效率达56％；②重组LZRS—Tat101毒能够在其感染的BCBL-1细胞中表达Tat蛋白，且表达蛋白具有转录激活功能；③Tat蛋白不能有效上调HHV-8Rta启动子活性；④细胞内HIV-1Tat蛋白诱导HHV-8可溶性周期复制的能力较弱。提示，单纯HIV-1Tat蛋白并不能激活潜伏感染的HHV-8。

Human Herpesvirus 8 Lytic Cycle Relication and Human Immunodeficiency Virus Type 1 Tat