| 头孢菌素C乙酰化酶的半理性改造及7-ACA的生物合成 |
| |
| 引用本文： | 马晨露,唐存多,史红玲,王瑞,岳超,夏敏,邬敏辰,阚云超.头孢菌素C乙酰化酶的半理性改造及7-ACA的生物合成[J].中国生物工程杂志,2015,35(12):65-71. |
| |
| 作者姓名： | 马晨露 唐存多 史红玲 王瑞 岳超 夏敏 邬敏辰 阚云超 |
| |
| 作者单位： | 1. 南阳师范学院昆虫生物反应器河南省工程实验室 南阳 473061;
2. 江南大学无锡医学院 无锡 214122 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(31401989)、河南省高等学校重点科研项目计划(15A416008)资助项目 |
| |
| 摘 要： | CPC乙酰化酶是一步酶法制备7-ACA的关键酶,针对它的研究具有重大的经济价值。为了获得对CPC具有更高催化活性的CPC乙酰化酶,以Pseudomonas sp SE 83来源的Ⅲ型CPC乙酰化酶CA Ⅲ为亲本,借助分子对接的手段确定了它与CPC结合的关键氨基酸残基,并确定将这些关键氨基酸残基突变为侧链基团更小的氨基酸残基,对CA Ⅲ的编码基因利用多点定点突变试剂盒完成定点突变后借助p ET32a质粒在E.coli BL21(DE3)中实现了可溶性表达,获得了对CPC催化活性更高的重组突变体reCA Ⅲ~M,其比酶活为26.7 IU/mg,较原酶提高了3.44倍。此外,初步研究了利用reCA Ⅲ~M进行一步酶法生产7-ACA的工艺,40 IU/g CPC的加酶量、25℃的条件下反应12 h,CPC的转化率和7-ACA的得率分别可达96.3%和63.4%,表明该酶具有良好的应用前景。CPC乙酰化酶的分子改造上取得的较为理想的结果,为该酶进一步的分子改造及应用奠定了坚实的基础,也为其它酶的分子改造提供了可资借鉴的经验。
|
| 关 键 词： | 理性设计 CPC乙酰化酶 分子改造 活性检测 生物催化 |
| 收稿时间： | 2015-07-06 |
Semi-rational Modification of Cephalosporin C Acylase and Biosynthesis of 7-ACA |
| |
| MA Chen-lu,TANG Cun-duo,SHI Hong-ling,WANG Rui,YUE Chao,XIA Min,WU Min-chen,KAN Yun-chao.Semi-rational Modification of Cephalosporin C Acylase and Biosynthesis of 7-ACA[J].China Biotechnology,2015,35(12):65-71. |
| |
| Authors: | MA Chen-lu TANG Cun-duo SHI Hong-ling WANG Rui YUE Chao XIA Min WU Min-chen KAN Yun-chao |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Biocatalysis Rational design CPC acylase Molecular modification Activity assay |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《中国生物工程杂志》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《中国生物工程杂志》下载免费的PDF全文 |
|
