| 摘 要： | 目的 探究使用重组胰酶(recombinant trypsin, RT)替代N-(对甲苯磺酰基)-L-苯基乙基氯甲基酮(N-p-Tosyl-L-phenylalanine chloromethyl ketone, TPCK)处理的牛源胰蛋白酶(TPCK-trypsin, TT),在基于无血清悬浮细胞培养的四价流感病毒裂解疫苗制备中的可行性。方法 用不同浓度的RT处理无血清悬浮培养的犬肾细胞(madin-darby canine kidney cell,简称MDCK细胞),检测其对细胞密度和细胞活力的影响。在流感病毒感染环节添加不同浓度的RT,在不同时间细胞收获病毒液,检测病毒滴度,确定适合的RT浓度。在2μg/mL RT的条件下,接种不同(亚)型流感病毒毒株,以检测不同时间病毒滴度及细胞密度,并在3 L生物反应器中验证RT对流感病毒扩增的影响。结果 当RT浓度<5μg/mL时,对无血清悬浮培养的MDCK细胞生长密度和细胞活力均无显著影响;在病毒感染与扩增过程中,添加终浓度为2μg/mL RT可保证不同(亚)型流感病毒疫苗株的有效扩增。其中,H1N1、H3N2、B/Vic、B/Ya...
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