肠道病毒71型灭活疫苗(Vero细胞)抗原含量检测方法的建立及应用 |
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引用本文: | 赵丽丽,谢学超,陈磊,李国顺,顾美荣,张改梅.肠道病毒71型灭活疫苗(Vero细胞)抗原含量检测方法的建立及应用[J].微生物学免疫学进展,2023(6):21-28. |
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作者姓名: | 赵丽丽 谢学超 陈磊 李国顺 顾美荣 张改梅 |
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作者单位: | 北京民海生物科技有限公司研发中心北京市新型联合疫苗工程技术研究中心 |
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摘 要: | 目的 建立肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV-A71)灭活疫苗(Vero细胞)抗原含量检测方法并对其进行方法学验证及初步应用。方法 以抗EV-A71兔多克隆抗体为包被抗体,辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)标记的抗EV-A71鼠单克隆抗体为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA并验证其线性范围、专属性、准确度、精密度及耐用性等。通过检测EV-A71疫苗原液及研发生产工艺各中间制品的EV-A71抗原含量评价该方法的适用性。结果 包被抗体与酶标抗体最佳稀释度分别为1∶5 000和1∶10 000。抗原为5~80 U/mL时,线性良好;与同为肠道病毒的其他抗原不存在交叉反应,专属性良好;对不同浓度抗原进行6次测定,其回收率在90%~100%,准确度良好;不同实验员对不同浓度抗原样品检测3次,CV均<11%,精密度良好;针对不同影响因素设计耐用性试验,回收率均在80%~120%,耐用性良好。该方法检测EV-A71疫苗原液和制备过程中的中间制品均具有良好的线性和平行性,表明该方法具有良好的适用性。结论 建立了EV-A71疫苗(Ve...
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关 键 词: | 肠道病毒71型 双抗体夹心 酶联免疫法 抗原含量 单克隆抗体 多克隆抗体 |
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