| 摘 要： | 在制备去Cu、Zn的酶蛋白方法上作了改进并提出新的制备途径,在此基础上对牛红细胞铜锌超氧化物歧化酶进行金属辅基去除和重组研究。通过对酶活性、吸收光谱、圆二色谱和电子自旋共振波谱变化的观察,比较系统地探究了天然酶(Holo-SOD),去Cu、Zn后的酶蛋白(Apo-SOD)和加入Cu~(2+)、Zn~(2+)重组后的酶(Reco-SOD)的性质,以及Cu和Zn对酶活性及功能方面的作用,其主要结果有以下几点:1.用改进法制备去除Cu、Zn的酶蛋白样品可以避免EDTA-Cu~(2+)络合物的污染,残存酶活力仅为天然酶的0.4%,在pH3.8～4.2条件下,加入Cu~(2+)、Zn~(2+)重组后,不仅酶活性可以恢复到98%,而且其UV、CD和ESR图谱均可以恢复到天然酶的状态。2.Cu为酶催化活性所必需。当过量的Zn~(2+)先加入酶蛋白中,然后再补加Cu~(2+),重组酶的活力恢复有所下降。而Zn~(2+)和Cu~(2+)单独加到酶蛋白中去时,Zn~(2+)对酶蛋白的UV图谱没有影响,Cu~(2+)则引起UV吸收大幅度上升。3.同时去除Cu、Zn后的酶蛋白(E_2E_2-SOD)比单独只去Cu后的酶蛋白(E_2Zn_2-SOD)的重组恢复更加困难。
|
