| 苏云金芽胞杆菌Sigma H对芽胞形成的影响 |
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| 引用本文： | 樊鑫桐,杜立新,高坦坦,彭琦,张杰,宋福平. 苏云金芽胞杆菌Sigma H对芽胞形成的影响[J]. 微生物学报, 2019, 59(2): 258-268 |
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| 作者姓名： | 樊鑫桐 杜立新 高坦坦 彭琦 张杰 宋福平 |
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| 作者单位： | 东北农业大学生命科学学院, 黑龙江 哈尔滨 150030;中国农业科学院植物保护研究所, 植物病虫害生物学国家重点实验室, 北京 100193,中国农业科学院植物保护研究所, 植物病虫害生物学国家重点实验室, 北京 100193,中国农业科学院植物保护研究所, 植物病虫害生物学国家重点实验室, 北京 100193,中国农业科学院植物保护研究所, 植物病虫害生物学国家重点实验室, 北京 100193,中国农业科学院植物保护研究所, 植物病虫害生物学国家重点实验室, 北京 100193,东北农业大学生命科学学院, 黑龙江 哈尔滨 150030;中国农业科学院植物保护研究所, 植物病虫害生物学国家重点实验室, 北京 100193 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31530095） |
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| 摘 要： | 【目的】检测苏云金芽胞杆菌HD73中的转录调控因子Sigma H(σ~H)对spo0A基因转录的调控作用;异源表达纯化Sigma H蛋白,验证其对spo0A基因启动子的直接结合;检测sigH基因的缺失对苏云金芽胞杆菌HD73芽胞形成和晶体蛋白产生的影响。【方法】通过测定spo0A基因启动子指导的β-半乳糖苷酶活性评价spo0A基因在苏云金芽胞杆菌HD73野生型和sigH缺失突变体中的转录水平;通过PCR扩增苏云金芽胞杆菌HD73的sigH基因并插入到表达载体pET21b上,将质粒转入到表达菌株BL21(DE3)中,得到重组菌株BL21 (pETsigH);利用镍柱亲和纯化和阴离子交换纯化得到纯化的Sigma H蛋白;通过凝胶迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证Sigma H蛋白与spo0A基因启动子的直接结合;通过显微镜观察、活芽胞计数的方法对突变株HDΔsigH进行表型特征分析。【结果】sigH缺失后,spo0A基因转录活性降低;在大肠杆菌中正确表达并纯化出大小约为28kDa的Sigma H-His蛋白;EMSA结果表明纯化后的Sigma H-His蛋白可与spo0A基因启动子结合;镜检和活芽胞计数结果表明突变株HDΔsigH无法产生芽胞和蛋白晶体。【结论】Sigma H蛋白通过与spo0A基因启动子结合直接调控spo0A基因的表达且sigH基因的缺失阻断了苏云金芽胞杆菌中芽胞和晶体蛋白的产生。
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| 关 键 词： | 苏云金芽胞杆菌 Sigma H 表达纯化 spo0A基因 芽胞形成 |
| 收稿时间： | 2018-03-20 |
| 修稿时间： | 2018-05-03 |
Effect of Sigma H on sporulation in Bacillus thuringiensis |
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| Xintong Fan,Lixin Du,Tantan Gao,Qi Peng,Jie Zhang and Fuping Song. Effect of Sigma H on sporulation in Bacillus thuringiensis[J]. Acta microbiologica Sinica, 2019, 59(2): 258-268 |
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| Authors: | Xintong Fan Lixin Du Tantan Gao Qi Peng Jie Zhang Fuping Song |
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| Affiliation: | College of Life Sciences, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, Heilongjiang Province, China;State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China,State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China,State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China,State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China,State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China and College of Life Sciences, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, Heilongjiang Province, China;State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Bacillus thuringiensis sigma H protein expression and purification spo0A sporulation |
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