| 超分辨显微技术结合smFISH方法在E. coli sRNA SgrS定位中的应用 |
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| 引用本文： | 王净,阮崇美,白园园,韩延平,杨瑞馥.超分辨显微技术结合smFISH方法在E. coli sRNA SgrS定位中的应用[J].生物化学与生物物理进展,2019,46(4):415-422. |
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| 作者姓名： | 王净 阮崇美 白园园 韩延平 杨瑞馥 |
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| 作者单位： | 河北北方学院动物科技学院，张家口 075131;军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所，北京 100071,信阳农林学院牧医工程学院，信阳 464000,河北北方学院动物科技学院，张家口 075131,军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所，北京 100071,军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所，北京 100071 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973计划)(2014CB744405)和河北省重点研发计划18236609D国家重点基础研究发展计划(973计划)(2014CB744405)和河北省重点研发计划(18236609D)资助项目. |
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| 摘 要： | 细菌调节小RNA通常与靶mRNA结合,影响翻译和mRNA降解过程.了解细菌小RNA的定量和定位信息,将有助于揭示细菌转录后水平的调控机制.小RNA SgrS通过抑制ptsG mRNA翻译起始,参与细菌磷酸葡萄糖代谢的应激过程.本研究应用单分子荧光原位杂交(smFISH)方法和超分辨显微技术可视化定位大肠杆菌细胞内小RNA SgrS,并初步验证伴侣分子Hfq蛋白和RNaseE降解酶对小RNA SgrS定位的影响.选取大肠杆菌模式菌MG1655 (野生株)、sgrS敲除株(△sgrS)和过表达株(△sgrS-pBAD-SgrS),使用RNA印迹和smFISH方法验证SgrS的过表达.应用smFISH方法分别在野生菌株、hfq敲除株(△hfq)和rne敲除株(△rne-710)中定位小RNA SgrS和ptsG mRNA,超分辨成像观察.与野生株相比,△hfq和△rne-710中SgrS主要定位于近膜区域,ptsG mRNA定位于细菌胞浆中,并且这两种RNA拷贝数均极显著增加.以上结果表明,分别敲除大肠杆菌hfq和rne-710基因导致SgrS和ptsG mRNA的表达量增加. smFISH方法和超分辨技术的结合应用为细菌RNA的直观定量和定位提供了高敏感性的检测方法,可用于基因调控的功能研究.
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| 关 键 词： | 大肠杆菌 Northern blot smFISH 超分辨显微技术 sRNA SgrS Hfq RNase E ptsG mRNA |
| 收稿时间： | 2018/9/29 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2019/2/15 0:00:00 |
Application in Localization of E. coli sRNA SgrS CombiningSuper-resolution Microscopy With smFISH Method |
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| WANG Jing,RUAN Chong-Mei,BAI Yuan-yuan,HAN Yan-Ping and YANG Rui-Fu.Application in Localization of E. coli sRNA SgrS CombiningSuper-resolution Microscopy With smFISH Method[J].Progress In Biochemistry and Biophysics,2019,46(4):415-422. |
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| Authors: | WANG Jing RUAN Chong-Mei BAI Yuan-yuan HAN Yan-Ping and YANG Rui-Fu |
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| Institution: | College of Animal Science and Technology, Hebei North University, Zhangjiakou 075131, China; Beijing Institute of Microbiology and Epidemiology, Beijing 100071, China,School of Animal Science and Veterinary Medicine, Xinyang Agriculture and Forestry University, Xinyang 464000, China,College of Animal Science and Technology, Hebei North University, Zhangjiakou 075131, China,Beijing Institute of Microbiology and Epidemiology, Beijing 100071, China,Beijing Institute of Microbiology and Epidemiology, Beijing 100071, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Escherichia coli Northern blot smFISH super-resolution microscopy sRNA SgrS Hfq RNase E ptsG mRNA |
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