| 固化金属离子亲和层析富集磷酸化多肽方法的选择及优化 |
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| 引用本文： | 李耀军,罗元明,武淑珍,高友鹤,刘彦信,郑德先. 固化金属离子亲和层析富集磷酸化多肽方法的选择及优化[J]. 生物学杂志, 2010, 27(1): 1-4. DOI: 10.3969/j.issn.1008-9632.2010.01.001 |
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| 作者姓名： | 李耀军 罗元明 武淑珍 高友鹤 刘彦信 郑德先 |
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| 作者单位： | 1. 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院,北京,100005
2. 中国科学院微生物研究所,北京,100101 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，国家重点基础研究项目特别基金 |
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| 摘 要： | 在磷酸化蛋白质组学研究中，根据是否需要对待富集样品进行甲酯化处理，可将固化金属离子亲和层析（IMAC）方法分为两类，即需要甲酯化处理的IMAC方法（ME—IMAC）和不需要甲酯化处理的IMAC方法（Non—ME—IMAC）。要实现对磷酸化多肽的有效富集和鉴定，就必须对富集方法进行选择和优化。利用基质辅助激光解析离子化串联飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS）对两种方法富集的磷酸化多肽进行了比较研究。结果表明，ME—IMAC方法容易发生样品丢失，质谱结果的分析也比较复杂，而Non—ME—IMAC方法则不仅操作简单而且富集效果理想。另外，优化了Non—ME—IMAC方法的实验条件，指出最佳的结合溶液是8％ACN／0．3％TFA，最佳的洗脱溶液是0．1mol／LEDTA（pH值8．0），从而建立了一套完整而简单有效的磷酸化多肽富集方法。
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| 关 键 词： | 磷酸化多肽 甲酯化反应 固化的金属离子亲和层析 质谱 |
Method for selection and optimization of phosphopeptide enrichment by immobilized-metal ion affinity chromatography |
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| LI Yao-jun,LUO Yuan-ming,WU Shu-zhen,GAO You-he,LIU Yan-xin,ZHENG De-xian. Method for selection and optimization of phosphopeptide enrichment by immobilized-metal ion affinity chromatography[J]. Journal of Biology, 2010, 27(1): 1-4. DOI: 10.3969/j.issn.1008-9632.2010.01.001 |
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| Authors: | LI Yao-jun LUO Yuan-ming WU Shu-zhen GAO You-he LIU Yan-xin ZHENG De-xian |
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| Affiliation: | LI Yao-jun1,LUO Yuan-ming2,WU Shu-zhen1,GAO You-he1,LIU Yan-xin1,ZHENG De-xian1(1.Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College,Beijing 100005,2.Institute of Microbiology,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100101,China) |
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| Abstract: | In phosphoproteomics,according to whether the sample treated with methyl esterification(ME) necessarily or not,immobilized-metal ion affinity chromatography(IMAC)can be divided into two kinds,ME-IMAC and Non-ME-IMAC.In order to find out better one of them,they were compared by MALDI-TOF-MS.The results firstly showed that ME-IMAC method could cause adsorptive losses easily and complicate the MS analysis and data interpretation;in contrast,Non-ME-IMAC method was a simpler and more efficient strategy for phosp... |
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| Keywords: | phosphopeptide methyl esterification immobilized-metal-ion affinity chromatography mass spectrometry |
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