| 在DH5α中拼接构建ADAM10全长真核表达载体的基因突变 |
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| 作者姓名： | 黄巍 李小鸥 周丽荣 黄晓刚 刘桥 |
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| 作者单位： | 1. 武汉市医学科学研究所基础医学研究室,湖北武汉,430014
2. 武汉大学人民医院儿科,湖北武汉,430060 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，武汉市卫生局科研项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建ADAMI0真核表达载体,为进一步研究其生物学功能打基础.方法:将人ADAM10的上下两部分基因片段(分别为全长基因的1 ～910bp和911 ～2 247bp片段),依次与真核表达载体pcDNA3.1相连,以大肠杆菌DH5α或BL21(DB)作为感受态宿主菌用于转化连接产物,拼接成全长的阳性克隆通过PCR、酶切和测序鉴定.结果:ADAM10下段基因与已正确连入上段的pcDNA3.1重组质粒拼接时,若用DH5α为感受态菌,则下半段出现碱基插入增加512bp,测序结果显示为ADAM10基因第1 531 bp～2 042 bp间的序列有紧邻的双份；若用BL21(DE3)为感受态,则无突变.结论:将ADAM10基因与pcDNA3.1真核表达载体依次拼接构建重组质粒时,以DH5α为宿主菌可出现基因序列增加的罕见突变,而以BL21(DE3)为宿主则无突变,由此成功构建ADAM10全长基因与pcDNA3.1的重组质粒.
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| 关 键 词： | ADAM10 真核表达载体 拼接 突变 DH5α BL21(DE3) |
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