| 极端嗜盐古菌质粒pSCM201衍生穿梭表达载体的构建及应用 |
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| 引用本文： | 苗荻,孙超岷,向华. 极端嗜盐古菌质粒pSCM201衍生穿梭表达载体的构建及应用[J]. 微生物学报, 2009, 49(8): 1040-1047 |
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| 作者姓名： | 苗荻 孙超岷 向华 |
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| 作者单位： | 中国科学院微生物研究所,微生物资源前期开发国家重点实验室,北京100101 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（30671141），国家“863计划”（2006AA09Z401） |
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| 摘 要： | 摘要：【目的】利用有自主知识产权的嗜盐古菌θ型复制质粒和启动子，构建在极端嗜盐古菌模式菌株西班牙盐盒菌（Haloarcula hispanica）中方便使用、功能完善的基因表达载体。【方法】以pSCM201的最小复制子为基础，通过引入莫维诺林抗性基因，大肠杆菌质粒复制子以及氨苄抗性基因，构建了一个新的嗜盐古菌-大肠杆菌穿梭载体。利用定点突变和末端补平法依次将其中多余的酶切位点去除后，再添加hsp5启动子核心序列、人工合成的多克隆位点以及蛋白纯化标签His?Tag等重要元件成功构建了嗜盐古菌表达载体pSCM307。将报告基因bgaH插入到该载体的多克隆位点中并转化H. hispanica AS2049，通过X-gal平板筛选和β-半乳糖苷酶酶活实验检测pSCM307的表达能力。【结果】pSCM307具有独立的自主复制能力，其多克隆位点方便实用，报告基因bgaH在hsp5启动子控制下实现了高效表达。【结论】成功构建了嗜盐古菌领域中第一个方便使用的基因表达载体。
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| 关 键 词： | 关键词：嗜盐古菌；pSCM201；穿梭载体；表达载体 |
| 收稿时间： | 2009-03-16 |
| 修稿时间： | 2009-04-03 |
Construction and application of a novel shuttle expression vector based on haloarchaeal plasmid pSCM201 |
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| Di Miao,Chaomin Sun and Hua Xiang. Construction and application of a novel shuttle expression vector based on haloarchaeal plasmid pSCM201[J]. Acta microbiologica Sinica, 2009, 49(8): 1040-1047 |
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| Authors: | Di Miao Chaomin Sun Hua Xiang |
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| Affiliation: | State Key Laboratory of Microbial Resources, Institute of Microbiology, Chinese Academy ofSciences, Beijing 100101, China;State Key Laboratory of Microbial Resources, Institute of Microbiology, Chinese Academy ofSciences, Beijing 100101, China;State Key Laboratory of Microbial Resources, Institute of Microbiology, Chinese Academy ofSciences, Beijing 100101, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Keywords: haloarchaea pSCM201 shuttle vector expression vector |
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