| 人ABCB6表达载体的构建及稳定表达细胞株A375的筛选 |
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| 引用本文： | 张彩娥,陈岚,任伟萍,梅爱华,邓云华.人ABCB6表达载体的构建及稳定表达细胞株A375的筛选[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2012,21(4):351-354. |
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| 作者姓名： | 张彩娥 陈岚 任伟萍 梅爱华 邓云华 |
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| 作者单位： | 1. 华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉科,武汉,430030
2. 华中科技大学同济医学院附属同济医院皮肤科,武汉,430030 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助（81071357,31171228）; 教育部博士点新教师基金资助（200804871043） |
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| 摘 要： | 目的构建表达载体pIRES2-ZsGreen1-ABCB6,在转染的人黑素瘤细胞系株A375中筛选其稳定表达的细胞株。方法抽取健康人外周血,分离外周血单个核细胞,提取总RNA,逆转录获取cDNA序列,加入特异性引物经PCR扩增获得ABCB6cDNA双链,再经过BglII、EcoRI双酶切PCR产物及质粒载体pIRES2-ZsGreen1,酶切产物经回收、T4DNA连接酶连接,产物转化到大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆经菌落PCR鉴定、酶切鉴定和测序分析,以确定构建质粒正确。转染人黑素瘤细胞株A375,G418筛选稳定表达ABCB6的单克隆细胞株,应用荧光显微镜鉴定ABCB6蛋白的表达情况。结果 pIRES2-ZsGreen1-ABCB6质粒经菌落PCR、酶切、测序鉴定正确,经过G418筛选后获得稳定细胞株,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光蛋白在A375细胞中的表达。结论表达载体pIRES2-ZsGreen1-ABCB6构建正确,并成功筛选出稳定表达ABCB6的A375细胞株,为进一步研究ABCB6的生物学功能奠定了良好基础。
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| 关 键 词： | ABCB6 表达载体 转染 A375细胞 |
Construction of ABCB6 Expression Vector and Screening of Its Stable A375 Cell Line |
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| Zhang Caie
,
Chen Lan
,
Ren Weiping
,
Mei Aihua
,
Deng Yunhua.Construction of ABCB6 Expression Vector and Screening of Its Stable A375 Cell Line[J].Chinese Journal of Histochemistry and Cytochemistry,2012,21(4):351-354. |
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| Authors: | Zhang Caie Chen Lan Ren Weiping Mei Aihua Deng Yunhua |
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| Institution: | 2 (1 Department of Anesthesiology, 2Department of Dermatology, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | ATP-binding cassette transporter g6 Expression vector Transfection A375 cells |
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