| 大肠杆菌磷酸甘油酸脱氢酶突变体的构建及抗反馈抑制效应 |
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| 引用本文： | 邓辉,陈存武,孙传伯,韦传宝. 大肠杆菌磷酸甘油酸脱氢酶突变体的构建及抗反馈抑制效应[J]. 生物工程学报, 2016, 32(4): 468-477 |
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| 作者姓名： | 邓辉 陈存武 孙传伯 韦传宝 |
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| 作者单位： | 1 皖西学院 生物与制药工程学院，安徽 六安 237012；2 六安市蛋白质分离与纯化研究中心，安徽 六安 237012,1 皖西学院 生物与制药工程学院，安徽 六安 237012,1 皖西学院 生物与制药工程学院，安徽 六安 237012,1 皖西学院 生物与制药工程学院，安徽 六安 237012；2 六安市蛋白质分离与纯化研究中心，安徽 六安 237012 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划 (863计划) (No. 2012AA021500)，国家重点基础研究发展计划 (973计划) (No. 2012CB720805)，国家自然科学基金 (Nos. 81274021，H2801)。 |
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| 摘 要： | 磷酸甘油酸脱氢酶(D-3-phosphoglycerate dehydrogenase,PGDH,EC 1.1.1.95)为L-丝氨酸合成途径的关键酶,其编码基因为ser A,其活性受到合成产物L-丝氨酸的反馈抑制调控。为解除丝氨酸的反馈抑制,采用定点突变技术把编码PGDH酶344位组氨酸或346位天冬氨酸或364位天冬氨酸的密码子定点突变为丙氨酸密码子。改造后的ser AFbr被连到表达载体pT7-7上,并转入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行表达,破壁回收粗酶液,通过DEAE阴离子柱纯化PGDH突变体,并对其酶活性和IC_(50)值进行了测定。结果,野生型PGDH酶IC_(50)值为7μmol/L,而PGDH双突变体N346A/H344A催化活性与野生型相近,在丝氨酸浓度为160 mmol/L时,其酶活仍保持未添加丝氨酸时酶活的96%,基本解除反馈抑制。
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| 关 键 词： | 大肠杆菌磷酸甘油酸脱氢酶 突变体的构建 解除反馈抑制 |
| 收稿时间： | 2015-07-27 |
Construction and characterization of Escherichia coli D-3-phosphoglycerate dehydrogenase mutants with feedback-inhibition relief |
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| Hui Deng,Cunwu Chen,Chuanbo Sun and Chuanbao Wei. Construction and characterization of Escherichia coli D-3-phosphoglycerate dehydrogenase mutants with feedback-inhibition relief[J]. Chinese journal of biotechnology, 2016, 32(4): 468-477 |
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| Authors: | Hui Deng Cunwu Chen Chuanbo Sun Chuanbao Wei |
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| Affiliation: | Hui Deng;Cunwu Chen;Chuanbo Sun;Chuanbao Wei;College of Biology and Pharmaceutical Engineering, West Anhui University;Research Center of Protein Separation and Purification; |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Escherichia coli phosphoglycerate dehydrogenase construction of mutants relief of feedback inhibition |
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