| 结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在毕赤酵母中的融合表达及其活性研究 |
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| 引用本文： | 刘林, 赵志安, 王洪海, 宋大新,.结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在毕赤酵母中的融合表达及其活性研究[J].生物工程学报,2004,20(6):958-962. |
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| 作者姓名： | 刘林 赵志安 王洪海 宋大新 |
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| 作者单位： | 复旦大学生命科学学院,上海,200433 |
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| 基金项目： | 国家“863”计划项目基金资助 (No .2 0 0 1AA2 15 2 0 1)~~ |
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| 摘 要： | 为了获得结核分枝杆菌ESAT 6蛋白在毕赤氏酵母中的高效表达 ,将人α-2a干扰素基因、结核分枝杆菌esat-6基因经PCR扩增并加上相应的酶切位点 ,两基因之间的DNA接头编码肠激酶识别的多肽 ,DNA经酶切连接插入分泌型载体pPIC9K ,将重组表达质粒pPIC9K-α2a-esat6用SalⅠ单酶切之后 ,电击转入PichiapastorisSMD1168中 ,采用G418梯度筛选获得高抗性转化子。以甲醇作为诱导物 ,发酵4d后取上清 ,进行SDS PAGE和Westernblot鉴定并分析表达产物的干扰素活性。结果表明 ,重组菌株成功地分泌表达了分子量大小约为 30kD的融合蛋白 ,表达产物不仅具有较高的干扰素活性 ,而且可以和结核病人血清发生特异性结合 ,为结核病的特异性诊断和结核病新型疫苗的研制打下了基础.
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| 关 键 词： | ESAT-6蛋白 人α-2a干扰素 分泌型载体 酵母SMD1168 融合表达 |
| 文章编号： | 1000-3061(2004)06-0958-05 |
| 修稿时间： | 2004年5月8日 |
Fusion Expression and Biological Activity Analysis of ESAT-6 Protein in Pichia pastoris |
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| LIU Lin,ZHAO Zhi-An,WANG Hong-Hai,SONG Da-Xin.Fusion Expression and Biological Activity Analysis of ESAT-6 Protein in Pichia pastoris[J].Chinese Journal of Biotechnology,2004,20(6):958-962. |
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| Authors: | LIU Lin ZHAO Zhi-An WANG Hong-Hai SONG Da-Xin |
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| Institution: | LIU Lin ZHAO Zhi-An WANG Hong-Hai SONG Da-Xin * |
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