| 人防御素6基因的克隆、亚克隆及在酵母中的分泌表达 |
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| 引用本文： | 单 颖,吴学敏,卢 颖.人防御素6基因的克隆、亚克隆及在酵母中的分泌表达[J].微生物学杂志,2014(3):61-65. |
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| 作者姓名： | 单 颖 吴学敏 卢 颖 |
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| 作者单位： | 辽宁医学院 免疫学教研室，辽宁 锦州 121000,辽宁医学院 免疫学教研室，辽宁 锦州 121000,辽宁医学院 免疫学教研室，辽宁 锦州 121000 |
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| 基金项目： | 辽宁省自然科学基金资助项目（201202140） |
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| 摘 要： | 探讨人防御素6(HD-6)在毕赤酵母中表达的可行性,为进一步研究HD6的功能提供理论依据和实验基础。采用PCR方法,设计引物从cDNA文库中扩增出人α防御素6基因片段,并将其插入到克隆载体pMD-18T中,再与毕赤酵母表达载体pPICZαA重组,以得到重组的HD-6酵母表达载体pPICZαA/HD-6,并进行琼脂糖电泳和测序鉴定。再将构建好的毕赤酵母重组表达质粒pPICZαA/HD-6经SacⅠ线性化后,应用LiCl法转化毕赤酵母菌株GS115感受态中,Zeocin平板筛选,PCR鉴定转化子。经摇瓶发酵和甲醇诱导,SDSPAGE分析重组HD-6的表达。从cDNA文库中扩增出的HD-6基因片断大小正确;电泳和测序结果均证明已将此片段克隆到酵母表达载体pPICZαA内;线性化的重组质粒pPICZαA/HD-6成功转化进入毕赤酵母感受态中,PCR鉴定结果与预期相符;蛋白电泳证实重组HD-6在酵母中获得分泌表达。提示重组HD-6可以在毕赤酵母中实现分泌表达。
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| 关 键 词： | 人防御素6 表达质粒 毕赤酵母 |
Clone, Sub Clone and Secretion Expression of Human Defensin 6 Gene in Pichia pastoris |
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| SHAN Ying,Wu Xue-min and LU Ying.Clone, Sub Clone and Secretion Expression of Human Defensin 6 Gene in Pichia pastoris[J].Journal of Microbiology,2014(3):61-65. |
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| Authors: | SHAN Ying Wu Xue-min and LU Ying |
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| Institution: | Teach & Res. Div. of Immunol., Liaoning Med. Coll., Jinzhou 121001,Teach & Res. Div. of Immunol., Liaoning Med. Coll., Jinzhou 121001 and Teach & Res. Div. of Immunol., Liaoning Med. Coll., Jinzhou 121001 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | human defensin 6 (HD-6) expression plasmid Pichia pastoris |
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