| 蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因的克隆、原核表达及其功能分析 |
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| 引用本文： | 杜次,李菁,唐云涛,彭清忠. 蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因的克隆、原核表达及其功能分析[J]. 生物工程学报, 2014, 30(8): 1299-1307 |
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| 作者姓名： | 杜次 李菁 唐云涛 彭清忠 |
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| 作者单位： | 1 吉首大学生物资源与环境科学学院，湖南 吉首 416000；2 植物资源保护与利用湖南省高校重点实验室，湖南 吉首 416000;1 吉首大学生物资源与环境科学学院，湖南 吉首 416000；2 植物资源保护与利用湖南省高校重点实验室，湖南 吉首 416000;1 吉首大学生物资源与环境科学学院，湖南 吉首 416000；2 植物资源保护与利用湖南省高校重点实验室，湖南 吉首 416000;1 吉首大学生物资源与环境科学学院，湖南 吉首 416000；2 植物资源保护与利用湖南省高校重点实验室，湖南 吉首 416000 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 31260081)，湖南省教育厅科学研究基金 (No. 13A078) 资助。 |
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| 摘 要： | 赖氨酸脱羧酶(Lysine decarboxylase,LDC)是抗老年痴呆药——石杉碱甲生物合成的第一个酶。为了研究蛇足石杉中LDC的特性和功能,以其总RNA为模板,通过RT-PCR扩增得到2个赖氨酸脱羧酶基因LDC1和LDC2,克隆至pMD?19-T中测序发现,两基因同源性为95.3%,分别编码212和202个氨基酸。将两基因引入pET-32a(+)构建重组表达质粒pET-32a(+)/LDC1和pET-32a(+)/LDC2,分别转入BL21(ED3)中进行诱导表达,在30℃条件下获得可溶性表达产物Trx-LDC1和Trx-LDC2;采用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白,建立酶促反应体系分析其脱羧酶活性,薄层层析(TLC)检测表明重组融合蛋白Trx-LDC1和Trx-LDC2均能催化赖氨酸脱羧生成尸胺。利用生物信息学软件分析发现LDC1和LDC2理化性质存在差异,但预测的二级结构和三维结构基本一致。
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| 关 键 词： | 蛇足石杉 赖氨酸脱羧酶 基因克隆 原核表达 酶活性 结构预测 |
| 收稿时间： | 2013-10-15 |
Cloning, prokaryotic expression and characterization of lysine decarboxylase gene from Huperzia serrata |
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| Ci Du,Jing Li,Yuntao Tang and Qingzhong Peng. Cloning, prokaryotic expression and characterization of lysine decarboxylase gene from Huperzia serrata[J]. Chinese journal of biotechnology, 2014, 30(8): 1299-1307 |
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| Authors: | Ci Du Jing Li Yuntao Tang Qingzhong Peng |
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| Affiliation: | 1 College of Biology and Environmental Sciences Jishou University, Jishou 416000, Hunan, China; 2 Key Laboratory of Plant Resource Conservation and Utilization, College of Hunan Province, Jishou 416000, Hunan, China;1 College of Biology and Environmental Sciences Jishou University, Jishou 416000, Hunan, China; 2 Key Laboratory of Plant Resource Conservation and Utilization, College of Hunan Province, Jishou 416000, Hunan, China;1 College of Biology and Environmental Sciences Jishou University, Jishou 416000, Hunan, China; 2 Key Laboratory of Plant Resource Conservation and Utilization, College of Hunan Province, Jishou 416000, Hunan, China;1 College of Biology and Environmental Sciences Jishou University, Jishou 416000, Hunan, China; 2 Key Laboratory of Plant Resource Conservation and Utilization, College of Hunan Province, Jishou 416000, Hunan, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Huperzia serrata lysine decarboxylase gene cloning prokaryotic expression enzyme activity structure prediction |
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