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SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR测定猴免疫缺陷病毒RNA拷贝数方法的建立
引用本文:丛喆,李兆忠,魏强,许琰,蒋虹,佟巍,卢圣栋,涂新明. SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR测定猴免疫缺陷病毒RNA拷贝数方法的建立[J]. 中国实验动物学报, 2006, 0(4)
作者姓名:丛喆  李兆忠  魏强  许琰  蒋虹  佟巍  卢圣栋  涂新明
作者单位:中国医学科学院中国协和医科大学实验动物研究所 北京100021(丛喆,魏强,许琰,蒋虹,佟巍,涂新明),中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所 北京100730(李兆忠,卢圣栋)
基金项目:中国CIPRA项目,美国NIH资助(编号:U19AI51915-04)
摘    要:目的建立SYBR Green I荧光染料实时定量RT-PCR方法,测定猴免疫缺陷病毒(SIV)RNA拷贝数。方法巢式RT-PCR扩增SIV病毒RNAgag基因上1360-1837之间的长度为477 bp的片段,将该片段克隆到pGEMT载体上,构建pGEM-SIVgag477质粒。该质粒经限制性内切酶NotⅠ酶切后,进行体外转录,转录出的RNA产物(RS)纯化后10倍系列稀释,作出标准曲线,作为SIV病毒RNA荧光定量检测的外标准品。结果应用Qiagen公司QuantiTect SYBR GREEN RT-PCR Kit,该标准品可精确定量到100 copies/μL。结论制备的RS外标准品纯度高,SYBR Green I荧光染料实时定量RT-PCR法特异性、敏感性高,稳定性好,可用于定量测定猴免疫缺陷病毒(SIV)RNA拷贝数。

关 键 词:SIV  病毒载量  实时荧光定量RT-PCR  SYBR Green I

Quantification of Simian Immunodeficiency Virus(SIV) Viral Load Using Real-Time Quantitative RT-PCR with SYBR Green I
CONG Zhe,LI Zhao-zhong,WEI Qiang,XU Yan,JIANG Hong,TONG Wei,LU Sheng-dong,TU Xin-ming. Quantification of Simian Immunodeficiency Virus(SIV) Viral Load Using Real-Time Quantitative RT-PCR with SYBR Green I[J]. Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica, 2006, 0(4)
Authors:CONG Zhe  LI Zhao-zhong  WEI Qiang  XU Yan  JIANG Hong  TONG Wei  LU Sheng-dong  TU Xin-ming
Affiliation:CONG Zhe~1,LI Zhao-zhong~2,WEI Qiang~1,XU Yan~1,JIANG Hong~1,TONG Wei~1,LU Sheng-dong~2,TU Xin-ming~
Abstract:
Keywords:SIV  Viral Load  Real time RT-PCR  SYBR Green I
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