| 结核分枝杆菌MPT83的免疫原性及其奶牛结核病血清学检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 孟闯,万婷,徐正中,单法,范峰,陈祥,焦新安.结核分枝杆菌MPT83的免疫原性及其奶牛结核病血清学检测方法的建立[J].微生物学报,2015,55(2):220-226. |
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| 作者姓名： | 孟闯 万婷 徐正中 单法 范峰 陈祥 焦新安 |
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| 作者单位： | 扬州大学，江苏省人兽共患病学重点实验室/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州225009,扬州大学，江苏省人兽共患病学重点实验室/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州225009,扬州大学，江苏省人兽共患病学重点实验室/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州225009,扬州大学，江苏省人兽共患病学重点实验室/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州225009,无锡市动物疫病预防控制中心，江苏无锡214026,扬州大学，江苏省人兽共患病学重点实验室/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州225009,扬州大学，江苏省人兽共患病学重点实验室/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州225009 |
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| 基金项目： | 国家“973 项目”(2012CB518805);国家星火计划项目(2014GA690017);扬州市自然科学基金项目(YZ2014027);江苏高校优势学科建设工程资助项目 |
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| 摘 要： | 【目的】利用大肠杆菌系统表达并纯化结核分枝杆菌MPT83蛋白,通过小鼠模型评价其免疫原性,建立血清学间接ELISA方法用于牛结核病临床检测,评价其应用潜能。【方法】构建p ET30a(+)-mpt83重组质粒,转化BL21(DE3)诱导表达并纯化,经细胞表面分子的流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)分析、ELISPOT试验等分析其在小鼠中的免疫原性,建立间接ELISA方法,检测临床奶牛血样,评价其用于牛结核病血清学检测的潜能。【结果】SDS-PAGE显示目的蛋白成功表达,Western blot证实其对兔抗H37Rv多抗血清具有良好免疫反应性;FCM结果显示其下调树突状细胞表面CD80分子的表达,上调小鼠脾脏CD4+和CD8+T细胞表面CD69的表达,ELISPOT结果表明其诱导的特异性IL-4分泌细胞数显著高于IFN-γ分泌细胞数,表现为Th2型免疫应答;建立了ELISA方法,检测临床奶牛血样200份,与牛结核外周血γ-干扰素体外释放试验结果的阳性符合率和阴性符合率分别为48.6%和90%。【结论】在大肠杆菌系统中高效可溶性表达MPT83蛋白,其在小鼠模型中主要呈现Th2型免疫应答,并以该蛋白为抗原建立了牛结核病血清学检测的间接ELISA方法。
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| 关 键 词： | 牛结核病 MPT83蛋白 原核表达 免疫原性 血清学检测 |
| 收稿时间： | 6/3/2014 12:00:00 AM |
| 修稿时间： | 9/1/2014 12:00:00 AM |
Immunogenicity evaluation of Mycobacterium tuberculosis MPT83 protein and establishment of serological diagnostic method for bovine tuberculosis detection |
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| Institution: | Chuang Meng;Ting Wan;Zhengzhong Xu;Fa Shan;Feng Fan;Xiang Chen;Xin’an Jiao;Jiangsu Key Lab of Zoonosis/Jiangsu Co-Innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonosis,Yangzhou University;Wuxi Center of Animal Disease Control and Prevention; |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | bovine tuberculosis MPT83 protein prokaryotic expression immunogenicity serological diagnosis |
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