| 一种可转移的重组工程系统 pYM-Red 的建立 |
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| 引用本文： | 于 梅,周建光,陈 伟,李山虎,黄翠芬. 一种可转移的重组工程系统 pYM-Red 的建立[J]. 生物化学与生物物理进展, 2005, 32(4): 359-364 |
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| 作者姓名： | 于 梅 周建光 陈 伟 李山虎 黄翠芬 |
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| 作者单位： | 1. 军事医学科学院生物工程研究所,北京,100850
2. 厦门大学生命科学学院,细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室,厦门,361005 |
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| 基金项目： | 军队“十五”医药卫生科学基金（01MA089）. |
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| 摘 要： | 重组工程是近几年发展的新型遗传工程技术. 以 PCR 扩增的线性低拷贝质粒 pACYC184 为载体，用 Gap-repair 方法从大肠杆菌 DY330 染色体上直接体内亚克隆了包括 Red 重组酶基因在内的长约 6.7 kb 的基因序列，构建了 pYM-Red 重组质粒. 在宿主菌 W3110 体内进行了染色体上 galk 基因的敲除，验证了 Red 重组酶的生物功能，并确定了影响 pYM-Red 重组效率的诱导时间和线性 DNA 片段用量. 在 42℃诱导 10 min 和线性 DNA 打靶分子浓度为 300 ng 时， pYM-Red 的重组效率可达到大约每 4 000 个电转存活细胞中有 1 个重组阳性克隆，分别比 pKD46 和 pBR322-Red 系统高 5~6 倍.
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| 关 键 词： | 重组工程， Red 重组系统， Gap-repair，体内克隆， pYM-Red 质粒 |
The Construction of a New Mobile Recombineering System of pYM-Red |
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| YU Mei,ZHOU Jian-Guang,CHEN Wei,LI Shan-Hu and HUANG Cui-Fen. The Construction of a New Mobile Recombineering System of pYM-Red[J]. Progress In Biochemistry and Biophysics, 2005, 32(4): 359-364 |
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| Authors: | YU Mei ZHOU Jian-Guang CHEN Wei LI Shan-Hu HUANG Cui-Fen |
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| Affiliation: | Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850, China;Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850, China;The Key Laboratory of Education Ministry for Cell Biology and Tumor Cell Engineering, School of Life Sciences, Xiamen University, Xiamen 361005, China;Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850, China;Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | recombineering red recombination system gap-repair in vivo cloning pYM-Red |
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