| 人偏肺病毒融合蛋白F的原核表达及初步应用 |
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| 引用本文： | 朱汝南,钱渊,赵林清,孙宇,邓洁,王芳. 人偏肺病毒融合蛋白F的原核表达及初步应用[J]. 病毒学报, 2011, 27(2): 144-150 |
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| 作者姓名： | 朱汝南 钱渊 赵林清 孙宇 邓洁 王芳 |
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| 作者单位： | 北京大学首都儿科研究所教学医院,北京,100020;北京大学首都儿科研究所病毒研究室,北京,100020;北京大学首都儿科研究所病毒研究室,北京,100020 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(No.30570080No.30872153); 北京市新星计划(2004B34); 北京市优秀人才项目(20071D0303200120) |
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| 摘 要： | 为了探讨人偏肺病毒(hMPV)融合蛋白(F)在原核表达系统中的表达效果及其应用价值,用大肠杆菌表达系统表达hMPV F1亚单位蛋白并用镍柱(Ni-NTA)进行亲和层析纯化,并以其为抗原,用Western Blot方法进行人血清抗体检测的探索。根据F蛋白的疏水性、抗原位点和表面可及性的预测结果选择F1亚单位为目标区域,在大肠杆菌BL21中分别得到了带有6个组氨酸(His)标记的不同基因型hMPV的F1亚单位蛋白的高效表达,目的蛋白大小约37.0 kD,主要以包涵体形式存在。Western Blot检测显示表达的目的蛋白可以特异性地结合抗hMPV的豚鼠多克隆抗体以及确定为hMPV急性感染患者的血清,而且与副粘病毒科肺病毒属的呼吸道合胞病毒(RSV)和副流感病毒(PIV)(2和3型)之间没有交叉反应,显示表达的F1蛋白的特异性和抗原性良好。应用该表达蛋白进行部分人群血清抗体检测的探索,结果显示人群血清抗hMPV-F蛋白的IgG抗体总阳性率约为66%~67%,0~2岁组的血清抗体阳性率随年龄增长呈现逐渐下降趋势,新生儿的抗体阳性率最高,达85%左右,>1岁~2岁组幼儿阳性率最低,提示母传抗体的存在。随后各年龄组人群随年龄的增长血清抗体阳性率逐渐增高,>60岁年龄组人群抗体水平最高,上述结果提示<2岁儿童为hMPV的易感人群。
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| 关 键 词： | 人偏肺病毒 融合蛋白F 原核表达 血清学 |
Prokaryotic Expression for Fusion Protein of Human Metapneumovirus and Its Preliminary Application as an Antigen for Antibody Detection |
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| ZHU Ru-nan,QIAN Yuan,ZHAO Lin-qing,SUN Yu,DENG Jie,WANG Fang. Prokaryotic Expression for Fusion Protein of Human Metapneumovirus and Its Preliminary Application as an Antigen for Antibody Detection[J]. Chinese journal of virology, 2011, 27(2): 144-150 |
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| Authors: | ZHU Ru-nan QIAN Yuan ZHAO Lin-qing SUN Yu DENG Jie WANG Fang |
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| Affiliation: | ZHU Ru-nan1,2,QIAN Yuan1,ZHAO Lin-qing2,SUN Yu2,DENG Jie2,WANG Fang2(1.Capital Institute of Pediatrics,Peking University,Beijing 100020,China,2.Laboratory of Virology,Capital Institute of Pediatrics,China) |
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| Abstract: | To understand the effectiveness of prokaryotic expression of fusion protein(F) of human metapneumovirus(hMPV) and its application as antigen,F proteins from different genotypes of hMPV were expressed in prokaryotic expression system and purified by Ni-NTA affinity chromatography column.According to the hydrophobicity,antigen index and surface probability of F protein,the subunit 1(F1) region of F protein was generated and expressed in E.Coil.BL21(DE3).The 6-His-F1 proteins with molecular weight of approxima... |
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| Keywords: | human metapneumovirus fusion protein prokaryotic expression antibody |
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