| 双峰驼源天然噬菌体纳米抗体展示库的构建及抗GDH纳米抗体筛选 |
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| 引用本文： | 方媛,徐广贤,王羡,王红霞,潘俊斐. 双峰驼源天然噬菌体纳米抗体展示库的构建及抗GDH纳米抗体筛选[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(12): 49-56. DOI: 10.13523/j.cb.20181207 |
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| 作者姓名： | 方媛 徐广贤 王羡 王红霞 潘俊斐 |
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| 作者单位： | 1 宁夏医科大学临床医学院 银川 7500042 宁夏医科大学总医院 银川 750004 |
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| 基金项目： | * 宁夏回族自治区重点研发计划重大(重点)项目(2018BEG02002);* 宁夏科技创新领军人才培养项目(KJT2015020) |
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| 摘 要： | 目的:构建噬菌体天然纳米抗体展示库,以期用于筛选不同抗原分子的纳米抗体筛选平台,并用艰难梭菌谷氨酸脱氢酶(GDH)抗原筛选靶向GDH的纳米抗体,对所构建的噬菌体天然纳米抗体展示库进行验证。方法:采用Oligo DT提取双峰骆驼脾脏总RNA进行反转录,通过巢氏PCR获取全套重链可变区基因,将其构建到噬菌粒pCANTAB5E载体,经多次电转化至E. coil TG1构建初级噬菌体抗体库,经辅助噬菌体拯救后构成噬菌体展示库,并对噬菌体展示库的库容及多样性进行分析和鉴定。同时以GDH为靶向抗原对文库进行淘筛,计算淘筛回收率,并对第三轮淘筛后平板的单克隆进行ELISA鉴定。结果:构建的天然噬菌体纳米抗体库的插入率为95%左右,随机挑取的9个克隆氨基酸同源性为66. 17%,经MEGA分析后具有较好的多样性,同时经辅助噬菌体拯救后,得到的噬菌体展示库滴度为4×10~(12)CFU/ml。在三轮淘筛过程中,回收率逐步升高,噬菌体得到了有效的富集,同时对阳性克隆进行测序及分析,最终得到2条抗GDH纳米抗体序列。结论:成功构建了双峰驼源天然噬菌体纳米抗体展示文库且多样性良好,为后续筛选其他的靶向抗原奠定了基础,同时筛选获得两条抗GDH纳米抗体序列,为制备艰难梭菌谷氨酸脱氢酶诊断抗体提供技术支撑。
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| 关 键 词： | 纳米抗体 噬菌体展示技术 艰难梭菌谷氨酸脱氢酶 |
| 收稿时间： | 2018-07-30 |
Construction of Camelid Natural Nanobody Phage Display Library and Screening for Anti-GDH Nanobody |
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| FANG Yuan,XU Guang-xian,WANG Xian,WANG Hong-xia,PAN Jun-fei. Construction of Camelid Natural Nanobody Phage Display Library and Screening for Anti-GDH Nanobody[J]. China Biotechnology, 2018, 38(12): 49-56. DOI: 10.13523/j.cb.20181207 |
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| Authors: | FANG Yuan XU Guang-xian WANG Xian WANG Hong-xia PAN Jun-fei |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Nanobodies Phage display technology GDH |
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