| 以番茄斑萎病毒核蛋白为靶点的荧光偏振药物筛选体系的建立及应用 |
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| 引用本文： | 王景丽,丁真真,刘辉,唐延婷.以番茄斑萎病毒核蛋白为靶点的荧光偏振药物筛选体系的建立及应用[J].中国生物工程杂志,2018,38(11):18-24. |
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| 作者姓名： | 王景丽 丁真真 刘辉 唐延婷 |
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| 作者单位： | 南开大学药学院 天津 300071 天津国际生物医药联合研究院 天津 300457 丹娜(天津)生物科技有限公司 天津 300467 |
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| 基金项目： | * 天津市科技计划资助项目(14ZCZDSY00046);天津市科技计划资助项目(13ZCZDSY03800) |
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| 摘 要： | 目的:基于荧光偏振技术建立靶向番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)核蛋白(NP)与核酸相互作用的药物筛选体系,并应用该体系展开药物筛选。方法:将目的基因克隆到pGEX-6p-1表达载体上,并采用大肠杆菌表达系统进行目的蛋白的异源表达。建立靶向TSWV NP与核酸相互作用的荧光偏振药物筛选体系,对体系的结合时间、DMSO耐受、变异性和稳定性进行研究,并展开药物筛选。结果:成功构建重组质粒pGEX-6p-1-NP,在大肠杆菌中表达并分离纯化出高质量的核蛋白。基于荧光偏振技术建立了信噪比为8∶1,Z因子为0. 82的稳定的靶向TSWV NP与核酸相互作用的药物筛选体系,并对化合物库中1 000种化合物展开药物筛选,经过初步筛选获得了1种IC_(50)为4. 15μmol/L的化合物。结论:建立了稳定的荧光偏振筛选体系,适用于靶向NP与核酸相互作用的药物的筛选。筛选到的化合物为番茄斑萎病毒的预防和控制提供参考。
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| 关 键 词： | 番茄斑萎病毒 核蛋白 荧光偏振 药物筛选 |
| 收稿时间： | 2018-03-05 |
Development and Application of the Binding Assay for Tomato Spotted Wilt Virus Nucleoprotein Using Fluorescent Polarization Technology |
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| Jing-li WANG,Zhen-zhen DING,Hui LIU,Yan-ting TANG.Development and Application of the Binding Assay for Tomato Spotted Wilt Virus Nucleoprotein Using Fluorescent Polarization Technology[J].China Biotechnology,2018,38(11):18-24. |
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| Authors: | Jing-li WANG Zhen-zhen DING Hui LIU Yan-ting TANG |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Tomato spotted wilt virus Nucleoprotein Fluorescence polarization Drug screening |
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