短短芽孢杆菌X23中edeB基因的克隆、原核表达及转录时相分析

短短芽孢杆菌（Brevibacillus brevis）X23可产生非核糖体肽类抗生素伊短菌素，已被广泛用于植物病害的生物防治。伊短菌素合成基因簇中，edeB基因参与调控伊短菌素的合成积累。本研究利用基因同源重组技术，以edeB基因作为外源基因的重组片段，构建了原核表达载体pET28a-edeB，转化至大肠杆菌BL21(DE)中进行诱导表达；通过转录组测序检测edeB基因在短短芽孢杆菌不同培养时间（12、18、24、30和36 h）的转录时相。结果表明：edeB基因全长为771 bp，编码256个氨基酸。聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）显示，在分子质量为30 kD处有一条特异条带，与生物信息学预测的EdeB蛋白的大小一致，且EdeB蛋白主要以包涵体的形式存在。转录时相分析结果表明，edeB基因在各个培养时间点均有表达，表达模式为先升高后降低，且在30 h时表达水平最高。这些结果为进一步研究edeB基因调控伊短菌素合成积累的分子机制奠定了基础，为短短芽孢杆菌高产伊短菌素菌株的构建提供了理论依据。