烟实夜蛾触角普通气味结合蛋白Ⅱ cDNA的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达

利用RT PCR技术扩增了编码烟实夜蛾Helicoverpa assulta雌、雄虫触角普通气味结合蛋白Ⅱ的Cdna片段，将其克隆至Pgem-T Easy载体，获得了普通气味结合蛋白Ⅱ基因成熟蛋白阅读框序列。将该基因重组到表达型质粒Pet-30a(+)中，并转化入原核细胞中表达。序列测定结果表明，烟实夜蛾触角普通气味结合蛋白基因的成熟蛋白阅读框全长489 bp，编码162个氨基酸残基，预测分子量和等电点分别为18.2 kD和5.35。推导的氨基酸序列与已报道的10种昆虫普通气味结合蛋白Ⅱ高度同源（73%～98%），并具有气味结合蛋白的典型特征。SDS-PAGE和Western印迹分析表明，经IPTG诱导，普通气味结合蛋白Ⅱ基因能在大肠杆菌BL21(DE3)中表达，电泳检测到一条约23 kD大小的外源蛋白，与预测的融合蛋白分子量大小相应。