肠杆菌膦酸酯代谢途径中phnF基因的研究

大肠杆菌的phn操纵子与膦酸酯(Pn)的利用密切相关。实验利用PCR扩增、TA克隆等方法．获得了大肠杆菌phn操纵子中phnE、phnF和phnG基因的亚克隆，并进行了序列测定。通过P1噬菌体转导，构建了phnF的TnphoA’-9转座子插入突变体JW19，该突变仅对大肠杆菌的AEPn同化有微弱的影响，而利用phnE和phnG序列与染色体重组构建的phnF全缺失突变株JW67，则几乎不能在．AEPn培养基上生长。通过phnF基因的诱导高表达，用亲和柱层析分离纯化了PhnF。蛋白，达到电泳纯。并且用凝胶延滞的方法观察到，PhnF蛋白与加phn操纵子DNA片段相互作用后，可使凝胶图谱类型发生改变。