沉默Gpr48基因表达对皮肤鳞状细胞癌细胞系A431 PKC信号通路活化及细胞侵袭的影响

目的分析沉默G蛋白偶联受体48 （Gpr48）基因表达对皮肤鳞状细胞癌（SCC）蛋白激酶C （PKC）信号通路及细胞侵袭能力的影响。 方法构建ShRNA感染皮肤SCC细胞株A431，设计干扰Gpr48表达shRNA（shRNA-Gpr48组）及阴性对照shRNA-NC组，采用实时定量反转录聚合酶联反应（RT-PCR）检测Gpr48相对表达量；以蛋白印迹法（Western Blot）测定PKC相关抗体蛋白表达情况，进行Transwell小室实验检测细胞侵袭能力，总结Gpr48缺失对三丙胺（TPA）刺激A431细胞株PKC活化及细胞侵袭能力的影响，为SCC靶向治疗提供参照。组间比较采用独立样本t检验。 结果qRT-PCR结果：shRNA-Gpr48组Gpr48相对表达量（0.27±0.06）低于shRNA-NC组（1.01±0.12），差异具有统计学意义（t?= 17.441，P?< 0.01），shRNA-Gpr48组p-PKCδ （0.463±0.035）低于shRNA-NC组（0.721±0.074），shRNA-?Gpr48组NF-κB p65 mRNA （0.631±0.079）低于shRNA-NC组（0.834±0.102），差异具有统计学意义（t?= 9.966、4.975，P均< 0.01），Notch1 mRNA（0.981±0.037）高于shRNA-NC组（0.562±0.041），差异具有统计学意义（t?= 23.991，P?< 0.01）；Western Blot结果：shRNA-Gpr48组p-PKCδ（0.221±0.034）低于shRNA-NC组（0.292±0.046）、NF-κB p65蛋白表达（0.512±0.047）低于shRNA-NC组（0.636±0.051），差异具有统计学意义（t?= 3.925，5.653，P均< 0.01），Notch1（0.524±0.063）高于shRNA-NC组（0.421±0.076），差异具有统计学意义（t?= 3.299，P?< 0.01）；shRNA-Gpr48组侵袭细胞率为（35.03±1.54）﹪，低于shRNA-NC组的（51.83±2.76）﹪，差异具有统计学意义（t?= 16.809，P?< 0.01）。 结论沉默Gpr 48缺失表达可能通过抑制PKC活化，降低p-PKCδ、NF-κB p65表达，上调抑癌基因Notch1表达，抑制癌细胞增殖、侵袭。

Effects of silencing Gpr48 gene expression on PKC signaling pathway activation and cell invasion in skin squamous cell carcinoma cell line A431