| 枯草杆菌可溶性YlyA蛋白的诱导表达与纯化研究 |
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| 引用本文： | 高文伟,霍乃蕊. 枯草杆菌可溶性YlyA蛋白的诱导表达与纯化研究[J]. 激光生物学报, 2009, 18(3): 418-422 |
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| 作者姓名： | 高文伟 霍乃蕊 |
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| 作者单位： | 山西农业大学动物科技学院,山西,太谷,030801;山西农业大学食品科学与工程学院,山西,太谷,030801 |
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| 基金项目： | 山西农业大学青年基金项目 |
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| 摘 要： | YlyA是枯草杆菌一种功能未知蛋白.本研究旨在建立可溶性YlyA的诱导表达体系和纯化方法,为其功能研究奠定基础.PCR扩增ylyA序列,将其克隆到pETMCSⅢ中构建表达载体pNG252,用IPTG诱导6×His-YlyA融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,对表达产物进行分析,最后对可溶性YlyA重组蛋白进行Ni2+-WTA亲和层析加以纯化.结果表明pNG252中ylyA的插入方向正确,序列无突变;用0.5 mmol/L IPTG,37℃诱导3 h时,YlyA虽高效表达,但为包涵体形式;调整诱导条件至0.05 mmoL/L IPTG,25℃,5 h时,高效表达的YlyA部分转为可溶性蛋白.纯化后的YlyA浓度达204.2119 μmoL/L;调整洗涤液中的咪唑浓度至15 mmol/L,pH至9,可使纯化蛋白的产量大幅提高.本文成功构建了YlyA高效可诱导表达载体,建立了可溶性蛋白的诱导表达条件,确立了Ni2+-NTA亲和层析纯化方法,所得的6×His-YlyA融合蛋白,可用于YlyA晶体结构和与功能分析.
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| 关 键 词： | 枯草杆菌 可溶性YlyA 诱导表达 纯化 |
Induced Overproduction and Purification of Soluble YlyA of Bacillus subtilis |
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| GAO Wen-wei,HUO Nai-rui. Induced Overproduction and Purification of Soluble YlyA of Bacillus subtilis[J]. ACTA Laser Biology Sinica, 2009, 18(3): 418-422 |
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| Authors: | GAO Wen-wei HUO Nai-rui |
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