共表达TCRα 12-2和TCRVβ 7.1重组腺病毒载体的构建及其杀伤肝癌细胞作用的研究 |
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引用本文: | 王俊伟,张巨峰,张文峰,牟艳芳,邵红伟,黄树林.共表达TCRα 12-2和TCRVβ 7.1重组腺病毒载体的构建及其杀伤肝癌细胞作用的研究[J].现代生物医学进展,2008,8(11). |
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作者姓名: | 王俊伟 张巨峰 张文峰 牟艳芳 邵红伟 黄树林 |
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作者单位: | 广东药学院生命科学与生物制药学院,广东,广州,510006 |
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基金项目: | ,国家自然科学基金,广东省自然科学基金,广东省科技计划,广东医学院校科研和教改项目 |
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摘 要: | 目的:构建共表达TCRα12-2和TCRVβ7.1重组腺病毒载体Ad.TCRα12.2-IRES-Vβ7.1,并研究其杀伤肝癌细胞的作用。方法:提取外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)总RNA,用RT-PCR的方法得到TCRα12-2基因。TCRVβ7.1基因由pCDN3.1-Vβ7.1扩增获得,将这两个基因以IRES相连克隆入腺病毒穿梭质粒pDC315中。穿梭质粒和腺病毒骨架质粒共转染HEK293细胞,包装出可同时表达TCRα12-2和TCRVβ7.1的重组腺病毒。然后提取病毒基因组DNA,对外源目的基因进行PCR鉴定;病毒感染宫颈癌细胞(HELA),48小时后提取细胞总RNA,通过RT-PCR鉴定目的基因表达;最后病毒感染PBMC,用流式细胞仪检测目的蛋白的表达。对鉴定正确的病毒进行大量扩增并测定滴度。用MTT比色法检测Ad.TCRα12-2-IRES-Vβ7.1感染的PBMC对肝癌细胞HEPG2和BEL-7402的杀伤作用。结果:从重组病毒基因组中扩增出目的基因TCRα12-2和TCRVβ7.1,RT-PCR和流式细胞仪检测表明目的基因可以有效的表达。Ad.TCRα12-2-IRES-Vβ7.1感染PBMC组对肿瘤细胞的杀伤率明显高于PBMC组和Ad-GFP感染组。结论:成功构建了双表达TCRα12-2和TCRVβ7.1基因的重组腺病毒载体Ad.TCRα12-2-IRES-Vβ7.1,且其感染后的PBMC可有效的杀伤肝癌细胞。
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关 键 词: | TCR 重组腺病毒栽体 TCRα12-2 TCRVβ7.1 |
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