茶树CsASMT基因的克隆和表达分析

该研究在茶树转录组测序的基础上，以茶树品种‘舒茶早’为试验材料，采用SMART^TM RACE技术，克隆了茶树褪黑素合成途径中关键限速酶N 乙酰基 5 羟色胺甲基转移酶基因（^CsASMT）的cDNA全长序列。^CsASMT基因序列全长1 282 bp，其中包含1 065 bp完整开放阅读框（ORF），编码354个氨基酸，预测等电点5.37，蛋白分子量38.98 kD。系统进化分析表明，CsASMT与珠美海棠（Malus zumi）ASMT9的亲缘关系最近。将目的基因分别与pET 32a(+)和pMal c2X载体重组，然后再转化入原核表达菌株BL21(DE3)中，pET 32a（+）/CsASMT在28 ℃用0.5 mg/mL IPTG诱导6 h后，以包涵体蛋白的形式表达，而pMal c2X/CsASMT经诱导后在上清中可获得分子量为79 kD大量可溶性融合蛋白。实时定量 PCR 分析表明，茶尺蠖取食抑制CsASMT基因表达；褪黑素、ABA、MeJA和SA均能够诱导CsASMT基因显著上调表达。该研究结果为N 乙酰基 5 羟色胺甲基转移酶功能研究奠定了一定的基础。