香菇HMG-box转录因子lelcrp1基因的功能 |
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引用本文: | 胡悦,蔡英丽,喻晶晶,周雁,李军平,边银丙,龚钰华.香菇HMG-box转录因子lelcrp1基因的功能[J].微生物学报,2018,58(12):2100-2109. |
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作者姓名: | 胡悦 蔡英丽 喻晶晶 周雁 李军平 边银丙 龚钰华 |
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作者单位: | 华中农业大学植物科学技术学院应用真菌研究所, 湖北 武汉 430070,华中农业大学植物科学技术学院应用真菌研究所, 湖北 武汉 430070,华中农业大学植物科学技术学院应用真菌研究所, 湖北 武汉 430070,华中农业大学植物科学技术学院应用真菌研究所, 湖北 武汉 430070,华中农业大学植物科学技术学院应用真菌研究所, 湖北 武汉 430070,华中农业大学植物科学技术学院应用真菌研究所, 湖北 武汉 430070,华中农业大学植物科学技术学院应用真菌研究所, 湖北 武汉 430070 |
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基金项目: | 公益性行业(农业)科研专项(201503137);湖北省技术创新重大项目(2016ABA100) |
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摘 要: | 【目的】研究香菇(Lentinula edodes) HMG-box转录因子LELCRP1 (Lentinula edodes lignocellulase genes regulation protein 1)在木质纤维素降解相关酶基因表达中的功能与作用。【方法】通过double-joint及同源重组方法构建lelcrp1基因RNAi载体,采用根癌农杆菌介导转化的方法转入香菇异核菌株W1菌丝中,筛选得到RNAi转化子,通过Southern杂交检测插入片段在菌株W1基因组中的拷贝数量。采用荧光定量PCR检测RNAi转化子木质纤维素降解酶基因表达水平变化,并在含有3.5μg/mL潮霉素的MYG平板上测定RNAi转化子的菌丝生长速度。【结果】获得了4个lelcrp1基因表达水平与出发菌株W1相比显著下调6–7倍的RNAi转化子。Southern杂交结果显示,lelcrp1基因RNAi片段已成功整合至香菇菌株W1基因组内,并以单拷贝形式存在。对其中2个RNAi转化子的26个木质纤维素降解酶基因表达水平进行分析,发现其中9个纤维素酶基因、1个半纤维素酶基因、2个辅助酶AA9基因和1个锰过氧化物酶基因的表达水平均表现出明显的下调。平板生长试验表明,RNAi转化子菌丝生长速度均显著慢于出发菌株W1。【结论】通过RNAi技术成功抑制了香菇异核菌株中lelcrp1基因表达水平,并导致部分纤维素及木质素酶基因表达水平相应下调,首次发现HMG-box结构域的转录因子能调控木质纤维素降解相关酶基因表达。
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关 键 词: | 香菇 HMG-box转录因子 木质纤维素酶基因 表达调控 RNAi |
收稿时间: | 2017/12/26 0:00:00 |
修稿时间: | 2018/1/29 0:00:00 |
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