无标签鼠疫耶尔森菌Ⅴ抗原突变体在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性分析 |
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引用本文: | 王猛,任军,张金龙,李浩,蔡晨光,李建民,陈薇.无标签鼠疫耶尔森菌Ⅴ抗原突变体在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性分析[J].生物技术通讯,2012(1):26-29. |
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作者姓名: | 王猛 任军 张金龙 李浩 蔡晨光 李建民 陈薇 |
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作者单位: | 军事医学科学院微生物流行病研究所,病原微生物与生物安全国家重点实验室,北京100071 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(81000710) |
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摘 要: | 目的:在大肠杆菌中表达、纯化无标签鼠疫耶尔森菌低钙反应V抗原突变体,并对其免疫原性进行研究。方法:采用融合PCR方法将Ⅴ抗原基因中编码半胱氨酸的碱基缺失突变,将获得得Ⅴ抗原突变体基因克隆到原核表达载体pET32a(+)后转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达并进行柱层析纯化,纯化产物以Western印迹进行鉴定并免疫BALB/c小鼠,通过ELISA检测免疫血清效价。结果:目的蛋白在大肠杆菌中获得了可溶性高表达,经三步柱层析后纯度高于95%,经Western印迹检测可与野生型V抗原单克隆抗体特异性结合,免疫小鼠后获得高效价免疫血清。结论:获得了无标签的鼠疫耶尔森菌Ⅴ抗原突变体蛋白,并证实其具有免疫原性,将对V抗原结构和功能的研究提供帮助。
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关 键 词: | 鼠疫耶尔森菌 Ⅴ抗原突变体 表达纯化 免疫原性 |
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