| 丹参病程相关蛋白基因PR10的克隆与表达分析 |
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| 引用本文： | 赵 乐,马利刚,王志霜,申 业,郑晓珂.丹参病程相关蛋白基因PR10的克隆与表达分析[J].西北植物学报,2015,35(6):1078-1084. |
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| 作者姓名： | 赵 乐 马利刚 王志霜 申 业 郑晓珂 |
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| 作者单位： | (1 河南中医学院 药学院,郑州 450046;2 中国中医科学院 中药资源中心,北京 100700) |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81173490,8130070);河南中医学院博士科研基金(BSJJ2011-07) |
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| 摘 要： | 病程相关蛋白(PR)的产生与积累是植物体应对生物或非生物胁迫的主要特征之一。该研究以人工培养的丹参幼苗为材料,通过分析丹参转录组数据,根据丹参病程相关蛋白基因PR10的序列设计特异性引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从丹参中获得PR10基因的开放阅读框(ORF),命名为SmPR10-1(GenBank注册号KF877034),并进行原核表达和纯化。结果表明:(1)SmPR10-1基因ORF为477bp,编码158个氨基酸,其蛋白质分子质量为17.38kD。(2)通过蛋白结构预测、序列多重比对和构建进化树等生物信息学分析,发现SmPR10-1基因具有保守序列(G-X-G-G-X-G)和(K-A-X-E-X-Y),其编码蛋白与葡萄等双子叶植物中的PR10蛋白同源性较高。(3)经异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,含有表达载体pET32a-SmPR10-1的大肠杆菌(Escherichia coli BL21)可诱导表达融合蛋白;对影响蛋白表达的4个因素优化结果表明,SmPR10-1蛋白的最佳表达条件为:IPTG终浓度0.4mmol/L、起始宿主菌密度A600为0.8、诱导温度30℃、诱导时间8h,并得到纯化的SmPR10-1蛋白。该结果为进一步研究SmPR10-1基因在丹参抗病方面的生物学功能和培育丹参抗病品种奠定了基础。
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| 关 键 词： | 丹参 病程相关蛋白 生物信息学分析 原核表达 条件优化 |
Cloning and Expression Analysis of Pathogenesis-related Protein 10 Gene of Salvia miltiorrhiza |
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| ZHAO Le,MA Ligang,WANG Zhishuang,SHEN Ye,ZHENG Xiaoke.Cloning and Expression Analysis of Pathogenesis-related Protein 10 Gene of Salvia miltiorrhiza[J].Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica,2015,35(6):1078-1084. |
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| Authors: | ZHAO Le MA Ligang WANG Zhishuang SHEN Ye ZHENG Xiaoke |
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| Keywords: | Salvia miltiorrhiza pathogenesis-related protein bioinformatic analysis prokaryotic expression optimization of expression condition |
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