EEF1A2基因慢病毒表达载体的构建及慢病毒表达系统的建立 |
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作者姓名: | 许朝 胡端敏 诸琦 |
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作者单位: | 许朝 (上海交通大学医学院附属瑞金医院消化内科,200025);胡端敏 (上海交通大学医学院附属瑞金医院消化内科,200025); 诸琦 (上海交通大学医学院附属瑞金医院消化内科,200025); |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助项目(30972921) |
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摘 要: | 利用PCR方法合成EEF1A2的基因全长,经NotⅠ和NsiⅠ酶切后克隆到慢病毒载体pGLV5-EF1a-EGFP/Puro上。构建的重组质粒pGLV5/EEF1A2经PCR、酶切及测序鉴定正确后,利用慢病毒表达系统(pGLV5 Lentiviral Expression Systems),将重组质粒与包装系统质粒(pVSV-G,pGag/Pol,pRev)4质粒共转染293T细胞,收集培养上清并感染人胰腺癌SW1990细胞,经嘌呤霉素筛选出稳定过表达细胞株EEF1A2/SW1990。Real-time PCR和West-ern blot检测结果显示EEF1A2在EEF1A2/SW1990细胞中表达较原代细胞明显增高(P<0.05),MTT结果显示EEF1A2/SW1990细胞的增殖能力亦较原代细胞显著增强(P<0.05)。成功构建了EEF1A2基因的慢病毒载体质粒pGLV5-EEF1A2及其慢病毒表达系统,并筛选出稳定过表达EEF1A2的人胰腺癌细胞株EEF1A2/SW1990。
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关 键 词: | 真核延伸因子1A2 慢病毒载体 真核表达 |
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