青海湖盐单胞菌QHL1 ectABC基因簇克隆鉴定及二氨基丁酸转氨酶基因ectB的异源表达 |
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作者姓名: | 刘建 朱德锐 李逸 李丹丹 李耀东 刘德立 |
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作者单位: | 刘建 (华中师范大学生命科学学院,湖北省遗传调控与整合生物学重点实验室,武汉,430079);朱德锐 (华中师范大学生命科学学院,湖北省遗传调控与整合生物学重点实验室,武汉,430079;青海大学医学院,西宁,810016);李逸 (华中师范大学生命科学学院,湖北省遗传调控与整合生物学重点实验室,武汉,430079);李丹丹 (华中师范大学生命科学学院,湖北省遗传调控与整合生物学重点实验室,武汉,430079); 李耀东 (青海大学医学院,西宁,810016); 刘德立 (华中师范大学生命科学学院,湖北省遗传调控与整合生物学重点实验室,武汉,430079); |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(No.31060013) |
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摘 要: | 从青海湖20份水样筛选得到一株优势中度嗜盐菌QHL1,经初步鉴定为盐单胞菌属。设计保守基因ectB的引物,以基因组DNA为模板,PCR扩增获得ectB基因(1269 bp)。利用染色体步移技术,克隆获得四氢嘧啶合成基因簇ectABC及其上下游调控序列。DNAStar软件分析表明ectA、ectB和ectC位于同一个操纵子上,大小分别为579 bp、1269 bp和390 bp,预测分别编码192、422和129个氨基酸的肽链。同源性分析表明:Halomonas sp.QHL1ectABC基因簇所编码的二氨基丁酸转乙酰基酶(EctA)、二氨基丁酸转氨酶(EctB)和四氢嘧啶合成酶(EctC)与Halomonas sp.Nj223 ectABC基因簇所编码的酶蛋白相似性分别达57%、96%和85%。利用分子克隆技术构建二氨基丁酸转氨酶基因ectB的重组表达载体pET-28-ectB,通过限制性内切酶酶切和测序分析,结果表明其目的基因的插入位置、大小和读码框均正确。诱导表达重组菌,SDS-PAGE分析,目的蛋白条带约46 kDa。
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关 键 词: | 青海湖 四氢嘧啶 染色体步移 ectABC基因簇 克隆表达 |
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