蜱传脑炎病毒TBE-E-D3抗原的原核表达纯化及ELISA方法鉴定 |
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作者姓名: | 王丹 康晓平 郝淮杰 郑玉玲 姜永强 杨银辉 陈福生 |
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作者单位: | 1. 华中农业大学食品科技学院,湖北武汉,430070 2. 军事医学科学院微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京100071 |
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摘 要: | 目的:构建蜱传脑炎病毒TBE-E-D3抗原的融合蛋白原核表达质粒GSTpET-30a(+)/TBE-E-D3,在大肠杆菌中诱导表达并用亲和层析法纯化,以获得特异性诊断抗原。方法:根据目的基因序列设计PCR引物,利用基因克隆技术构建重组质粒,转入大肠杆菌DH5α后经酶切鉴定,将测序正确的重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后进行亲和层析法纯化,SDS-PAGE分析其表达情况和纯度,间接ELISA法鉴定重组蛋白的特异性和灵敏度。结果:TBE-E-D3基因目的片段以正确的读框插入载体GSTpET-30a(+),通过IPTG诱导在大肠杆菌中正确表达,亲和纯化得到较高纯度的蛋白质;间接ELISA法证明抗原特异性和灵敏度良好,送检的15份阳性患者血清样本中检出10份阳性结果,40份健康人血清样本中检出1份假阳性结果。结论:获得的His-TBE-E-D3融合蛋白具有良好的抗原性,可作为森林脑炎病毒特异性血清学诊断的备选抗原之一。
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关 键 词: | 蜱传脑炎病毒 TBE-E-D3抗原 原核表达 纯化 特异性 |
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