| 在烟草中酵母脯氨酸基因B的转化(英文) |
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| 引用本文： | 袁朝兴,白永延,匡达人.在烟草中酵母脯氨酸基因B的转化(英文)[J].植物生理与分子生物学学报,1993(3). |
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| 作者姓名： | 袁朝兴 白永延 匡达人 |
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| 作者单位： | 中国科学院上海植物生理研究所植物分子遗传国家重点实验室，中国科学院上海植物生理研究所植物分子遗传国家重点实验室，中国科学院上海细胞生物研究所 上海 200032，上海 200032，上海 20003 |
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| 摘 要： | 重组质粒PYP22带有一从酵母基因文库分离到的4.6 kb DNA片段,此片段含有脯氨酸(Pro)合成途径必须的基因B(ProB)。用BamHⅠ酶解PYP22,回收ProB基因,重组入pGA471的Bg Ⅲ切口,形成含有ProB的双质粒载体PBYU4。pBYU4含有能在植物中表达的新霉素磷酸转移酶基因Ⅱ(NPT—Ⅱ),可做转基因植株的筛选标记。借助于辅助质粒pRK2013,pBYU4经过三亲结合转移到农杆菌LAB4404,在含有四环素12.5μg/ml、链霉素100μg/ml和利福平50μ/ml加的AB培养基上筛选出转接合子。提取筛选得到的农杆菌总DNA,用ECoR 1酶解,1％琼脂糖电泳,Southern转移DNA到硝酸纤维素膜上。用α—~(32)P-dCTP标记的ProB片段,与转移好的硝酸纤维素进行Southern杂交。Southern杂交证明含有ProB基因的农杆菌,在加有乙酸丁香酮(acetosyringone)125μg/ml和章鱼碱(octopine)125μg/ml的MS液体培养基中,诱导过夜。用叶圆片法转化革新1号烟草(Nicotana tabacum var.Gexin No.1),叶片与菌液共培养2～5d。从叶片分化再生出的芽转移到含有卡那霉素(K_m)80μg/ml、6—苄基腺嘌呤(6BA)1μg/ml和头孢氨噻腭钠(Cef)500μg/ml的MS培养基,筛选3周,将绿色的芽转移到含l％NaCl,6BA 1μg/ml和Cef 500μg/ml的MS培养基,进行复筛。测定经过这样筛选的再生芽的NPT—Ⅱ活性。
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| 关 键 词： | 根瘤农杆菌 脯氨酸基因B 烟草 耐盐性 转化 |
Transfer of Yeast ProB Gene into Tobacco Plants |
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| YUAN Chao-Xing,BAI Yong-Yan National Laboratory of Plant Molecular Genetics.Transfer of Yeast ProB Gene into Tobacco Plants[J].Journal Of Plant Physiology and Molecular Biology,1993(3). |
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| Authors: | YUAN Chao-Xing BAI Yong-Yan National Laboratory of Plant Molecular Genetics |
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| Institution: | YUAN Chao-Xing,BAI Yong-Yan National Laboratory of Plant Molecular Genetics,Shanghai Institute of Plant Physiology,Academia Sinica,Shanghai 200032 KUANG Da-Ren Shanghai Institute of Cell Biology,Academia Sinica,Shanghai 200031 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Agrobacterium tumefaciens ProB tobacco salinity tolerance tranformation |
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