| 细胞周期蛋白D1特异性核酶表达载体的构建及其活性 |
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| 引用本文： | 夏金荣,黄晓明,刘乃丰,胡向阳.细胞周期蛋白D1特异性核酶表达载体的构建及其活性[J].细胞生物学杂志,2007,29(1):122-126. |
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| 作者姓名： | 夏金荣 黄晓明 刘乃丰 胡向阳 |
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| 作者单位： | 东南大学临床医学院 南京210009 |
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| 基金项目： | 江苏省镇江市社会发展基金 |
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| 摘 要： | 应用mfold程序对锤头状核酶(ribozyme,Rz)和大鼠细胞周期蛋白(cyclin)D1基因的二级结构进行分析,设计合成锤头状Rz基因,通过RT-PCR扩增获得大鼠细胞周期蛋白D1目的基因,将Rz基因和细胞周期蛋白D1基因分别克隆入载体pGEM-3Zf( )中,体外转录Rz基因和靶基因并进行切割实验;将Rz基因与逆转录病毒载体pLXSN重组得到Rz真核表达载体pLXSN-Rz,将其转染入HSC-T6细胞,G418筛选出阳性细胞克隆,用RT-PCR检测细胞周期蛋白D1基因的表达。结果显示:针对目的基因的832位点设计合成了Rz832,成功获得Rz832基因、细胞周期蛋白D1mRNA的体外转录载体pGEM3Zf-Rz832和pGEM3Zf-cD1,经体外转录出Rz832(105nt)及细胞周期蛋白D1mRNA(1079nt)。体外切割实验证实Rz832能够特异性切割细胞周期蛋白D1mRNA,产生1014nt和65nt的切割产物,切割效率为80%。所构建的pLXSN-Rz832经酶切电泳、PCR鉴定显示,插入的Rz832序列大小约为57bp,与预期结果相同,经测序证实Rz832序列正确。转染pLXSN-Rz832的肝星状细胞(hepaticstellatecells,HSCs)细胞周期蛋白D1mRNA的表达受到明显抑制,仅为对照组的42.22%(t=-193.443,P<0.01),结果表明:Rz832能够在体外特异性切割细胞周期蛋白D1mRNA、并在HSC-T6细胞内有效抑制细胞周期蛋白D1基因的表达。
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| 关 键 词： | 核酶 细胞周期蛋白D1 体外转录 切割 |
| 修稿时间： | 2006-08-11 |
Construction of Specific Hammerhead Ribozyme Targeting Cyclin D1 mRNA and Its Activity in Vitro and Hepatec Stellate Cells |
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| Jin-Rong Xia,Xiao-Ming Huang,Nai-Feng Liu,Xiang-Yang Hu.Construction of Specific Hammerhead Ribozyme Targeting Cyclin D1 mRNA and Its Activity in Vitro and Hepatec Stellate Cells[J].Chinese Journal of Cell Biology,2007,29(1):122-126. |
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| Authors: | Jin-Rong Xia Xiao-Ming Huang Nai-Feng Liu Xiang-Yang Hu |
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| Institution: | School of Clinical Medicine, Southeast University, Nanfing 210009, China |
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