| 半滑舌鳎基因组的提取及ISSR反应体系的建立 |
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| 引用本文： | 张志伟,陈大鹏,张曹进,许广平,张志勇.半滑舌鳎基因组的提取及ISSR反应体系的建立[J].生物技术,2006,16(6):44-47. |
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| 作者姓名： | 张志伟 陈大鹏 张曹进 许广平 张志勇 |
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| 作者单位： | 1. 江苏省海洋水产研究所,江苏,南通,226007
2. 江苏省淡水水产研究所,江苏,南京,210017 |
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| 基金项目： | 江苏省海洋渔业开发项目(编号:HYKF-SJ05-0026)，江苏省科技厅重大招标项目(编号:BE2005304)，江苏省科技厅高技术研究发展项目(编号:BG2004318)资助 |
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| 摘 要： | 目的:比较CTAB法和STE法提取半滑舌鳎基因组DNA的效果,通过优化半滑舌鳎ISSR-PCR反应体系,将新型分子标记简单重复间序列(Inter-simple sequence repeat,ISSR),引用到半滑舌鳎遗传多样性研究中。方法:以95%酒精固定的半滑舌鳎鳍条为材料,运用CTAB法和STE法提取基因组DNA,同时分析了模板DNA、Mg2 、dNTPs、引物浓度,以及退火温度对ISSR-PCR扩增结果的影响。结果:CTAB法提取的基因组DNA质量好于STE法提取的结果,同时确立了稳定性强、重复性好的半滑舌鳎ISSR-PCR最佳反应体系和扩增参数。在25lμPCR反应体系中包括:1×PCR缓冲液,2mmol/L MgCl2,0.2mmol/L dNTP,0.2μmol/L ISSR引物,20ng模板DNA,1.5U Taq DNA聚合酶。反应程序为:94℃预变性5min,然后进入PCR循环,即94℃变性45s,52℃退火45s,72℃延伸90s,共进行40个循环。最后72℃延伸10min。结论:ISSR-PCR反应体系稳定可靠,该新型分子标记可应用于半滑舌鳎遗传多样性研究中。
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| 关 键 词： | 半滑舌鳎 基因组DNA ISSR 反应体系 遗传多样性 |
| 文章编号： | 1004-311X（2006）06-13044-04 |
| 收稿时间： | 2006-08-30 |
| 修稿时间： | 2006-10-17 |
Extraction of Genomic DNA and Establishment of ISSR - PCR Reaction Conditions in Cynoglossus semilaevis Gtinther |
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| ZHANG Zhi-wei,CHEN Da-peng,ZHANG Cao-jin,XU Gang-ping,ZHANG Zhi-yong.Extraction of Genomic DNA and Establishment of ISSR - PCR Reaction Conditions in Cynoglossus semilaevis Gtinther[J].Biotechnology,2006,16(6):44-47. |
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| Authors: | ZHANG Zhi-wei CHEN Da-peng ZHANG Cao-jin XU Gang-ping ZHANG Zhi-yong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cynoglossus semilaevis Gtinther Genomic DNA ISSR reaction system genetic diversity |
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