| 逆病毒载体介导双耐药基因在脐血CD34+细胞中的表达和抗性研究 |
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| 引用本文： | 王季石,夏学鸣,陈子兴,卢大儒,薛京伦,阮长耿.逆病毒载体介导双耐药基因在脐血CD34+细胞中的表达和抗性研究[J].分子细胞生物学报,2000,33(4):341-348. |
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| 作者姓名： | 王季石 夏学鸣 陈子兴 卢大儒 薛京伦 阮长耿 |
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| 作者单位： | 王季石（江苏省血液研究所，苏州医学院附一院血液科，苏州 215006）;夏学鸣（江苏省血液研究所，苏州医学院附一院血液科，苏州 215006）;陈子兴（江苏省血液研究所，苏州医学院附一院血液科，苏州 215006）;卢大儒（复旦大学遗传学研究所，上海 200433）;薛京伦（复旦大学遗传学研究所，上海 200433）;阮长耿（江苏省血液研究所，苏州医学院附一院血液科，苏州 215006） |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目和贵州省科委基金资助项目 |
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| 摘 要： | 为探讨转染醛脱氢酶基因(ALDHl)和多药耐药基因(MDRl)的人脐血CD34+细胞能否同时增强对活性环磷酰胺(4-HC)和MDRl基因靶药的抗性，构建了同时含ALDHl和MDRl双耐药基因的逆转录病毒表达质粒GlNa-ALDHl-IRES-MDRl，经LipofectAMINE介导转染GP+E86和PA317包装细胞，采用含长春新碱(VCR)和4-HC的培养基克隆选择后收集重组病毒上清于单向型GP+E86与双嗜型PA317包装细胞行乒乓交互感染，获得PA317重组病毒生产细胞(最高滴度达5.6×105CFU／ml)，将含ALDHl和MDRl双耐药基因重组病毒的上清在细胞生长因子刺激下重复感染人脐血CD34+细胞，用PCR、RT-PCR、Southernblot、Northernblot、FACS和MTT等方法检测外源ALDHl与MDRl基因在CD34+细胞中的转移和表达。结果显示逆转录病毒载体介导的双耐药基因已经整合人转染靶细胞基因组并获得有效表达，同时传递不同的耐药表型。经双耐药基因修饰的脐血CD34+细胞对4-HC和VCR药物同时产生抗性，其IC50值分别比未转染细胞高4倍和7.2倍，本研究为开展肿瘤基因治疗的临床研究奠定了实验基础。
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| 关 键 词： | 醛脱氢酶基因(ALDHl)多药耐药基因(MDRl)逆转录病毒载体 基因共表达 造血干细胞 基因疗法 脐血 |
| 修稿时间： | 1999-07-07 |
Study on Expression and Resistance of the Double Drug Resistance Genes Transduced into Human Umbilical Cord Blood CD34+Cells Mediated by Bicistronic Retroviral Vector |
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| WANG Ji Shi,XIA Xue Ming,CHAN Zi Xing,LU Da Ru,XUE Jing Luen,RUAN Chang Geng.Study on Expression and Resistance of the Double Drug Resistance Genes Transduced into Human Umbilical Cord Blood CD34+Cells Mediated by Bicistronic Retroviral Vector[J].Journal of Molecular Cell Biology,2000,33(4):341-348. |
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| Authors: | WANG Ji Shi XIA Xue Ming CHAN Zi Xing LU Da Ru XUE Jing Luen RUAN Chang Geng |
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| Affiliation: | WANG Ji Shi
,XIA Xue Ming
,CHAN Zi Xing
;(First Affiliated Hospital of Suzhou Medical college,Jiangsu Institute of Hematology,Suzhou 215006);LU Da Ru
,XUE Jing Luen
;(Institute of Genetics,Fudan University,Shanghai 200433);RUAN Chang Geng
;(First Affiliated Hospital of Suzhou Medical college,Jiangsu Institute of Hematology,Suzhou 215006) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Aldehyde-dehydrogenase-classlgene(ALDHl) Mutidrug resistance gee(MDR1) Retrovirus vector Gene co-expression Hematopoietic stem cells Gene therapy Cord blood |
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