| 非对称二甲基精氨酸水解酶的表达纯化及其酶学性质的研究 |
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| 引用本文： | 赵志敬,王学忠,沈文婷,胡广. 非对称二甲基精氨酸水解酶的表达纯化及其酶学性质的研究[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(4): 46-53 |
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| 作者姓名： | 赵志敬 王学忠 沈文婷 胡广 |
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| 作者单位： | 1. 北大工学院绍兴技术研究院生物工程中心 绍兴 312000;2. 绍兴科锐捷生物科技有限公司 绍兴 312030 |
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| 基金项目： | 浙江省绍兴市绍兴县科技项目资助项目 |
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| 摘 要： | 非对称二甲基精氨酸水解酶(dimethylarginine Dimethylaminohydrolase,DDAH)是酶学循环法检测早期急性心肌梗塞(acute myocardial infarction,AMI)的生物标记物——非对称二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine,ADMA)的重要工具酶.为获得高活性DDAH,从绿脓杆菌的基因组中扩增目的基因,构建高效表达DDAH的重组菌E.coli BL 21(pET-28a-DDAH).该菌的可溶性DDAH表达量达100mg/L,经超声破碎后的上清液通过镍柱纯化,可获得纯度达到95％以上的重组DDAH.Q柱的精制可提高它的稳定性,使其能够在常温下长期保持酶活.该重组酶的单位酶活,Km值和Vmax分别为0.5U/mg,3.04 mM和8.07mM/h.最适反应温度和pH分别为35℃和pH =6,在10℃～40℃和pH5.0～ pH9.0的范围内稳定.该重组酶可形成多聚体,但并不影响酶活.最后,利用发酵罐扩大生产规模,有望进行克级生产,为新型ADMA检测试剂盒的开发和药物筛选模型提供材料基础.
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| 关 键 词： | DDAH ADMA 蛋白纯化 酶学性质 |
| 收稿时间： | 2012-10-11 |
Expression, Purification and Characterization of Dimethylarginine Dimethylaminohydrolase |
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| ZHAO Zhi-jing,WANG Xue-zhong,SHEN Wen-ting,HU Guang. Expression, Purification and Characterization of Dimethylarginine Dimethylaminohydrolase[J]. China Biotechnology, 2013, 33(4): 46-53 |
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| Authors: | ZHAO Zhi-jing WANG Xue-zhong SHEN Wen-ting HU Guang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | DDAH ADMA Expression and purification Enzymatic characteristic |
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