DAS-ELISA法快速检测食品中副溶血弧菌TDH毒素

建立副溶血弧菌TDH毒素DAS-ELISA快速检测法,并运用于食品样品实际检测。以TDH+副溶血弧菌菌体及其TDH毒素制备免疫原,分别免疫新西兰大白兔和BALB/c小鼠,制备兔抗副溶血性弧菌多克隆抗体和鼠抗TDH毒素多克隆抗体,以鼠抗TDH毒素多克隆抗体为捕获抗体,兔抗副溶血弧菌多克隆抗体为检测抗体,建立DAS-ELISA检测法。采用间接ELISA法测定抗体效价,采用棋盘滴定法选择最佳的抗原抗体反应条件,并确定DAS-ELISA各反应条件。结果表明:鼠抗TDH多克隆抗体、兔抗副溶血弧菌多克隆抗体与TDH毒素抗原的最佳工作浓度依次为1:8 000、1:4 000和12μg/m L,酶标二抗最佳工作浓度为1:1 000,检测总时间为5 h,该法具有很强的特异性,对食品中TDH毒素的检测低限为60μg/g。与国标检测方法相比,具有检测时间短,准确度高的优点,将会得到广泛运用。