| 农杆菌介导的蛹虫草营养缺陷型菌株和遗传转化体系的构建 |
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| 引用本文： | 王立,黄慧,刘新平,王兴明,曾斌,胡志宏. 农杆菌介导的蛹虫草营养缺陷型菌株和遗传转化体系的构建[J]. 微生物学通报, 2022, 49(8): 3373-3386 |
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| 作者姓名： | 王立 黄慧 刘新平 王兴明 曾斌 胡志宏 |
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| 作者单位： | 江西科技师范大学生命科学学院, 江西 南昌 330013;江西省生物加工过程重点实验室, 江西 南昌 330013;江西省九江市农业科学院, 江西 九江 332101;江西科技师范大学生命科学学院, 江西 南昌 330013;江西省生物加工过程重点实验室, 江西 南昌 330013;深圳技术大学药学院, 广东 深圳 518118 |
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| 基金项目： | 江西省科技厅项目(20192ACBL20012，20202BDH80007，20212BA205001)；江西科技师范大学青年拔尖人才项目(2019QNBJRC004) |
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| 摘 要： | 【背景】天然蛹虫草是蛹虫草菌侵染昆虫蛹或虫形成的子实体,具有非常重要的生物药理活性。目前蛹虫草基因组测序已经完成,但是其分子生物学研究较少。【目的】在蛹虫草中构建一种以尿苷/尿嘧啶营养缺陷型为筛选标记的农杆菌介导的转基因体系。【方法】乳清酸核苷-5′-磷酸（orotidine-5′-monophosphate,OMP）脱羧酶为尿嘧啶合成必需酶,利用根癌农杆菌介导的转化（Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT）方法,通过同源重组对蛹虫草野生型菌株中该酶的编码基因pyrG进行敲除,构建尿苷/尿嘧啶营养缺陷型突变体。然后,利用本实验室已有的米曲霉pyrG为筛选标记的二元转化载体,通过农杆菌转化法对该营养缺陷型菌株进行遗传转化。【结果】通过同源重组法,成功敲除pyrG构建了尿嘧啶营养缺陷型蛹虫草,以此为背景,在22℃共培养66h,成功对蛹虫草实现转基因,转化效率为（75±35）/106孢子。另外,本研究还发现丝状真菌常用的构巢曲霉3-磷酸甘油醛脱氢酶启动子PgpdA及α淀粉酶启动子PamyB不能在蛹虫草...
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| 关 键 词： | 蛹虫草 根癌农杆菌介导的转化 尿嘧啶营养缺陷型 |
| 收稿时间： | 2021-12-09 |
Construction of Agrobacterium-mediated auxotrophic strain and genetic transformation system of Cordyceps militaris |
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| WANG Li,HUANG Hui,LIU Xinping,WANG Xingming,ZENG Bin,HU Zhihong. Construction of Agrobacterium-mediated auxotrophic strain and genetic transformation system of Cordyceps militaris[J]. Microbiology China, 2022, 49(8): 3373-3386 |
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| Authors: | WANG Li HUANG Hui LIU Xinping WANG Xingming ZENG Bin HU Zhihong |
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| Affiliation: | College of Life Sciences, Jiangxi Science and Technology Normal University, Nanchang 330013, Jiangxi, China;Jiangxi Key Laboratory of Bioprocess Engineering, Nanchang 330013, Jiangxi, China;Jiujiang Academy of Agricultural Sciences, Jiujiang 332101, Jiangxi, China;College of Life Sciences, Jiangxi Science and Technology Normal University, Nanchang 330013, Jiangxi, China;Jiangxi Key Laboratory of Bioprocess Engineering, Nanchang 330013, Jiangxi, China;College of Pharmacy, Shenzhen Technology University, Shenzhen 518118, Guangdong, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cordyceps militaris Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation uracil auxotrophic |
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