| 极耐热性乳酸脱氢酶高效表达、纯化及酶学性质 |
| |
| 引用本文： | 钱国军,陈彩平,翟如英,邵蔚蓝,梅艳珍.极耐热性乳酸脱氢酶高效表达、纯化及酶学性质[J].生物工程学报,2014,30(4):545-553. |
| |
| 作者姓名： | 钱国军 陈彩平 翟如英 邵蔚蓝 梅艳珍 |
| |
| 作者单位： | 南京师范大学生命科学学院，江苏 南京 210046;南京师范大学生命科学学院，江苏 南京 210046;南京师范大学生命科学学院，江苏 南京 210046;江苏大学食品与生物工程学院，江苏 镇江 212000;南京师范大学生命科学学院，江苏 南京 210046 |
| |
| 基金项目： | 江苏省高校自然科学基金 (No. 11KJB80005)，国家自然科学基金 (No. 41306139) 资助。 |
| |
| 摘 要： | 从海栖热袍菌扩增出编码乳酸脱氢酶的基因并将其插入热激载体pHsh构建表达质粒,在大肠杆菌Escherichia coli中进行表达产生极耐热性乳酸脱氢酶Tm-LDH。基因表达产物通过热处理,可以一步获得接近电泳纯的重组酶。酶学性质研究表明,Tm-LDH的最适反应温度为95℃,最适pH 7.0;纯酶在90℃的半衰期为2 h,在pH 5.5–8.0之间最稳定;SDS-PAGE结果显示分子量为33 kDa,与理论推算值相吻合。以丙酮酸和NADH为底物时,相对于丙酮酸的Km值1.7 mmol/L,Vmax为3.8×104 U/mg;相对于NADH的Km值7.2 mmol/L,Vmax值为1.1×105 U/mg。Tm-LDH基因在T7载体中未能实现高效表达,但是在热激载体pHsh中得到了可溶性超量表达,表达水平达到340 mg/L。该酶在65℃反应条件下,活性达到最高活性的50%,并能保持活性不变,这使该酶能够与常温酶匹配,在辅酶NAD再生体系的建立中具有广泛的用途。
|
| 关 键 词： | 极耐热性乳酸脱氢酶 pHsh热激载体 辅酶NAD再生 |
| 收稿时间： | 9/3/2013 12:00:00 AM |
Expression, purification and characterization of a thermostable lactate dehydrogenase from Thermotoga maritima |
| |
| Guojun Qian,Caiping Chen,Ruying Zhai,Weilan Shao and Yanzhen Mei.Expression, purification and characterization of a thermostable lactate dehydrogenase from Thermotoga maritima[J].Chinese Journal of Biotechnology,2014,30(4):545-553. |
| |
| Authors: | Guojun Qian Caiping Chen Ruying Zhai Weilan Shao and Yanzhen Mei |
| |
| Institution: | Department of Life Science, Nanjing Normal University, Nanjing 210046, Jiangsu, China;Department of Life Science, Nanjing Normal University, Nanjing 210046, Jiangsu, China;Department of Life Science, Nanjing Normal University, Nanjing 210046, Jiangsu, China;School of Food and Biological Engineering, Jiangsu University, Zhenjiang 212000, Jiangsu, China;Department of Life Science, Nanjing Normal University, Nanjing 210046, Jiangsu, China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | thermostable lactate dehydrogenase pHsh expression system NAD regeneration |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《生物工程学报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《生物工程学报》下载免费的PDF全文 |
|
