基于TLR4MyD88信号通路观察粪菌移植对DSS诱导小鼠溃疡性结肠炎干预作用机制

摘要 目的：探讨粪菌移植（fecal microbiota transplantation，FMT）对葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate, DSS）诱导小鼠溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）干预作用及其炎症相关的分子机制。方法：30只昆明小鼠采用DSS喂养建立结肠炎小鼠模型并随机分为模型组、FMT低剂量组和FMT高剂量组，另取10只作为对照组。FMT低剂量组、FMT高剂量组自造模后第1 d开始分别给予8 g/kg、15 g/kg粪菌剂量灌肠处理，灌肠体积0.2 mL。对照组和模型组给予等体积生理盐水灌肠处理。分别在实验第1、7、14及21 d称量小鼠体重。实验结束后处死小鼠，取出结直肠，观察各组小鼠结直肠形态变化并通过HE染色观察病变程度。ELISA检测小鼠结直肠组织匀浆液上清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin 6, IL-6）、白细胞介素-4（interleukin 4, IL-4）和白细胞介素-10（interleukin 10, IL-10）的表达变化；免疫组化法和RT-qPCR分别检测结直肠组织中核因子κB-P65亚基 (nuclear factor-κB P65, NF-κB P65)蛋白和mRNA的表达情况；Western blotting检测结直肠组织中Toll 样受体4 (Toll-like receptor 4，TLR4)、髓样分化因子 88(myeloid differentiation factor 88，MyD88)的蛋白表达情况。结果：对照组相比，造模小鼠在第6 d起至第14 d体重明显减轻，差异具有统计学意义（P<0.05）；与模型组相比，FMT低、高剂量组小鼠第10 d起至第14 d体重明显减轻，FMT高剂量组小鼠体重升高更加明显，差异具有统计学意义（P<0.05）；与对照组相比，模型组小鼠结直肠组织中TNF-α、IL-6、NF-κB P65 mRNA和蛋白阳性表达、TLR4、MyD88 蛋白表达均显著升高(P<0.05)，IL-4、IL-10表达显著下降（P<0.05）；FMT高剂量组IL-4、IL-10较模型组显著升高，其余指标均显著下降（P<0.05）。结论：FMT可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路缓解炎症反应，发挥对UC的治疗作用。

Based on the TLR4/MyD88 Signaling Pathway, the Mechanism of Fecal Bacteria Transplantation on the Intervention of Dss-induced Ulcerative Colitis in Mice was Observed