| T7 启动子作用下人尿激酶原 cDNA 在大肠杆菌中的高效表达及分离纯化 |
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| 引用本文： | 彭贵洪, 马忠, 薛宇鸣, 陈于红, 朱德煦,. T7 启动子作用下人尿激酶原 cDNA 在大肠杆菌中的高效表达及分离纯化[J]. 生物工程学报, 1997, 13(4): 362-367 |
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| 作者姓名： | 彭贵洪 马忠 薛宇鸣 陈于红 朱德煦 |
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| 作者单位： | 南京大学生物化学系南京大学医药生物技术重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家“863”高技术研究发展计划 |
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| 摘 要： | 化学合成的人尿激酶原ｃＤＮＡ克隆在表达质粒ｐＥＴ－１１ｄ中，在Ｔ７启动子的作用下，经０．１ｍｍｏｌ／Ｌ ＩＰＴＧ诱导，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中获得表达。其表达量占菌体总蛋白的１５％，表达产物以无活性的包涵体形式存在。经体外变复性，Ｚｎ＾２＋选择性沉淀，抗体亲和柱层析，及Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ亲和吸附，所表达的人尿激酶原被纯化为单一条带，其比活约１１００００ＩＵ／ｍｇ。
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| 关 键 词： | 人尿激酶原 高效表达 分离 纯化 T7启动子 |
High level Expression in Escherichia coli and Purification of Human pro UK cDNA |
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| Peng Guihong Ma Zhong Xue Yuming Chen Yuhong Zhu Dexu. High level Expression in Escherichia coli and Purification of Human pro UK cDNA[J]. Chinese journal of biotechnology, 1997, 13(4): 362-367 |
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| Authors: | Peng Guihong Ma Zhong Xue Yuming Chen Yuhong Zhu Dexu |
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| Abstract: | A chemically synthesized human pro urokinase (pro UK) cDNA was cloned into the expression vector pET 11d,and expressed in E.coli BL21(DE3) pLysS under the control of T7 promoter.By using 0.1mmol/L IPTG induction,the expression level of the recombinant pro UK was over 15% of total bacterial proteins as inclusion bodies.After denaturation and renaturation in vitro ,the expressed pro UK was purified to Identity by Zn 2+ selective precipitation,immuno affinity chromato graphy,and Benzamidine affinity adsorption.The specific activity of the purified human pro UK was about 110000IU/mg. |
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| Keywords: | Human pro UK high level expression denaturation and renaturation purification |
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