| 组成型表达重组人C-反应蛋白的毕赤酵母菌株构建 |
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| 引用本文： | 李军明,林衡,葛高顺,张立超,于昉,胡学军. 组成型表达重组人C-反应蛋白的毕赤酵母菌株构建[J]. 生物技术, 2013, 23(1): 22-25 |
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| 作者姓名： | 李军明 林衡 葛高顺 张立超 于昉 胡学军 |
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| 作者单位： | 1. 大连大学医学院医学研究中心,辽宁大连,116622
2. 大连大学生命科学与技术学院,辽宁大连,116622 |
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| 基金项目： | 国家自然基金项目，辽宁省高等学校科研计划项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建组成型表达重组人C-反应蛋白(Recombinant human C-reactive protein,rhCRP)的毕赤酵母工程菌株,表达、纯化rhCRP并鉴定其免疫反应性。方法:将设计合成的rhCRP基因克隆到表达载体pGAPZαA上并转化至毕赤酵母X-33中进行组成型分泌表达,通过His亲和层析柱纯化rhCRP。分别采用SDS-PAGE、Western blot和间接ELISA法检测目的蛋白并鉴定其免疫反应性。结果:重组表达载体pGAPZαA/rhCRP经酶切及DNA测序鉴定构建成功。重组毕赤酵母工程菌株成功组成型表达23kDa的rhCRP,27h即达到最大表达水平,表达量约3mg/L。经一步分离纯化获得纯度为96.58%的rhCRP,经间接ELISA检测表明其具有免疫反应性。结论:成功构建了组成型分泌表达rhCRP的毕赤酵母菌株,为进一步自主研发人CRP检测试剂奠定了基础。
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| 关 键 词： | C-反应蛋白 毕赤酵母 组成型表达 免疫反应性 |
Construction of Pichia pastoris Strains Constitutively Expressing Recombinant Human C-reactive Protein |
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| LI Jun-ming , LIN Heng , GE Gao-shun , ZHANG Li-chao , YU Fang , HU Xue-jun. Construction of Pichia pastoris Strains Constitutively Expressing Recombinant Human C-reactive Protein[J]. Biotechnology, 2013, 23(1): 22-25 |
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| Authors: | LI Jun-ming LIN Heng GE Gao-shun ZHANG Li-chao YU Fang HU Xue-jun |
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| Affiliation: | 1(1.Medical Research Center,Medical School,Dalian University,Dalian 116622,China; 2.College of Life Science and Technology,Dalian University,Dalian 116622,China) |
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| Abstract: | |
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